肝纖維化是一種慢性和持續(xù)性肝損傷,與炎癥反應(yīng)的病理狀態(tài)有關(guān),巨噬細(xì)胞是肝纖維化中炎癥的主要誘因。肝臟巨噬細(xì)胞通過釋放不同促炎癥因子作用于肝星狀細(xì)胞,調(diào)節(jié)肝纖維化的發(fā)生發(fā)展。環(huán)狀RNA(circ RNA)是一類廣泛存在于多種真核生物體內(nèi),具有閉合環(huán)狀結(jié)構(gòu)的非編碼RNA分子。研究發(fā)現(xiàn)circ RNA可以充當(dāng)miRNA的海綿,在多種病理學(xué)和生物學(xué)過程中調(diào)節(jié)基因表達(dá)。但是,circ RNA在CCl₄誘導(dǎo)的肝纖維化中的表達(dá)譜仍有待研究。在這項(xiàng)研究中,課題組通過高通量測(cè)序揭示了肝纖維化中原代肝臟巨噬細(xì)胞中差異表達(dá)的circ RNA,選擇20個(gè)下調(diào)的circ RNA進(jìn)行real-time PCR驗(yàn)證。在CCl₄誘導(dǎo)的肝纖維化小鼠和LPS刺激的RAW264.7細(xì)胞中,circ＿0000038的表達(dá)都顯著降低,提示我們其可能參與肝纖維化過程。分別在小鼠體內(nèi)和體外RAW264.7細(xì)胞中轉(zhuǎn)染circ＿0000038過表達(dá)慢病毒,通過western blot、real-time PCR、ELISA等實(shí)驗(yàn)對(duì)circ＿0000038參與肝纖維化進(jìn)程進(jìn)行探究。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示...

【文章頁數(shù)】：86 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
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中文摘要
Abstract
1 前言
2 實(shí)驗(yàn)材料
    2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和實(shí)驗(yàn)細(xì)胞
    2.2 主要試劑
    2.3 儀器與設(shè)備
    2.4 主要溶液的配制
3 實(shí)驗(yàn)方法
    3.1 構(gòu)建 CCl₄誘導(dǎo)的肝纖維化模型
    3.2 灌流小鼠原代肝臟巨噬細(xì)胞
    3.3 肝組織病理學(xué)檢測(cè)
    3.4 ALT和 AST檢測(cè)
    3.5 RAW264.7細(xì)胞培養(yǎng)和活化
    3.6 RNA熒光原位雜交(FISH)
    3.7 慢病毒的感染
    3.8 酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)
    3.9 Western blot
    3.10 Real-time PCR
    3.11 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    4.1 circRNAs 在 CCl₄誘導(dǎo)的肝纖維化小鼠中表達(dá)譜分析
    4.2 circ₀000038在LPS誘導(dǎo)的RAW264.7 細(xì)胞的表達(dá)變化
    4.3 circ₀000038過表達(dá)減輕肝纖維化小鼠的炎癥反應(yīng)
    4.4 RAW264.7 細(xì)胞中過表達(dá)circ₀000038 對(duì)細(xì)胞炎癥反應(yīng)的調(diào)節(jié)作用
    4.5 circ₀000038 通過靶向miR-323-3p抑制炎癥反應(yīng)
    4.6 circ₀000038 靶向miR-323-3p通過JAK2/STAT1 信號(hào)通路抑制炎癥反應(yīng)
5 討論
6 結(jié)論
7 參考文獻(xiàn)
附錄
致謝
綜述 circRNA 在肝臟疾病中的研究進(jìn)展
    參考文獻(xiàn)



本文編號(hào)：3856542