肝纖維化是一種慢性和持續(xù)性肝損傷,與炎癥反應的病理狀態(tài)有關,巨噬細胞是肝纖維化中炎癥的主要誘因。肝臟巨噬細胞通過釋放不同促炎癥因子作用于肝星狀細胞,調節(jié)肝纖維化的發(fā)生發(fā)展。環(huán)狀RNA(circ RNA)是一類廣泛存在于多種真核生物體內,具有閉合環(huán)狀結構的非編碼RNA分子。研究發(fā)現(xiàn)circ RNA可以充當miRNA的海綿,在多種病理學和生物學過程中調節(jié)基因表達。但是,circ RNA在CCl₄誘導的肝纖維化中的表達譜仍有待研究。在這項研究中,課題組通過高通量測序揭示了肝纖維化中原代肝臟巨噬細胞中差異表達的circ RNA,選擇20個下調的circ RNA進行real-time PCR驗證。在CCl₄誘導的肝纖維化小鼠和LPS刺激的RAW264.7細胞中,circ＿0000038的表達都顯著降低,提示我們其可能參與肝纖維化過程。分別在小鼠體內和體外RAW264.7細胞中轉染circ＿0000038過表達慢病毒,通過western blot、real-time PCR、ELISA等實驗對circ＿0000038參與肝纖維化進程進行探究。實驗結果顯示...

【文章頁數(shù)】：86 頁

【學位級別】：碩士

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中文摘要
Abstract
1 前言
2 實驗材料
    2.1 實驗動物和實驗細胞
    2.2 主要試劑
    2.3 儀器與設備
    2.4 主要溶液的配制
3 實驗方法
    3.1 構建 CCl₄誘導的肝纖維化模型
    3.2 灌流小鼠原代肝臟巨噬細胞
    3.3 肝組織病理學檢測
    3.4 ALT和 AST檢測
    3.5 RAW264.7細胞培養(yǎng)和活化
    3.6 RNA熒光原位雜交(FISH)
    3.7 慢病毒的感染
    3.8 酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)
    3.9 Western blot
    3.10 Real-time PCR
    3.11 統(tǒng)計學分析
4 實驗結果
    4.1 circRNAs 在 CCl₄誘導的肝纖維化小鼠中表達譜分析
    4.2 circ₀000038在LPS誘導的RAW264.7 細胞的表達變化
    4.3 circ₀000038過表達減輕肝纖維化小鼠的炎癥反應
    4.4 RAW264.7 細胞中過表達circ₀000038 對細胞炎癥反應的調節(jié)作用
    4.5 circ₀000038 通過靶向miR-323-3p抑制炎癥反應
    4.6 circ₀000038 靶向miR-323-3p通過JAK2/STAT1 信號通路抑制炎癥反應
5 討論
6 結論
7 參考文獻
附錄
致謝
綜述 circRNA 在肝臟疾病中的研究進展
    參考文獻



本文編號：3856542