目的:研究重組AdipoQ基因在真核細(xì)胞中的表達(dá)情況,利用電穿孔的方法將表達(dá)載體導(dǎo)入減毒沙門(mén)氏菌并表達(dá),純化蛋白,檢測(cè)其在體外對(duì)L-02肝細(xì)胞脂肪變性的抑制作用,為人AdipoQ在NAFLD的基因治療方面的應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。 方法:(1)從人脂肪組織中提取總RNA,通過(guò)RT-PCR方法獲得AdipoQ基因,將其克隆到真核熒光表達(dá)載體pEGFP-N1上,構(gòu)建重組質(zhì)粒pEGFP-N1- AdipoQ;(2)將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染COS-7細(xì)胞,通過(guò)報(bào)告基因熒光蛋白的表達(dá)、RT-PCR和Western blot檢測(cè)其融合蛋白在真核細(xì)胞中的表達(dá);(3)將重組質(zhì)粒pEGFP-N1- AdipoQ通過(guò)電穿孔的方法導(dǎo)入減毒沙門(mén)氏菌并表達(dá);(4)通過(guò)亞克隆法構(gòu)建重組質(zhì)粒pET32a(+)-AdipoQ ,轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21 ,以IPTG誘導(dǎo)表達(dá)pET32a(+)-AdipoQ融合蛋白。表達(dá)產(chǎn)物經(jīng)Ni-NTA瓊脂糖樹(shù)脂純化后,用Western Blot分析;(5)將融合蛋白作用于油酸誘導(dǎo)脂肪變的L-02肝細(xì)胞,研究其對(duì)肝細(xì)胞脂肪變的抑制情況。 結(jié)果:(1)通過(guò)RT-PCR方法克隆得到AdipoQ基因片斷,長(zhǎng)度為7...

【文章頁(yè)數(shù)】：63 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
符號(hào)說(shuō)明
中文摘要
英文摘要
論文正文：重組脂聯(lián)素在非酒精性脂肪肝病中作用的初步探討
    前言
    第一部分 脂聯(lián)素基因真核表達(dá)載體的構(gòu)建及表達(dá)
        1 材料和方法
        2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3 討論
    第二部分 重組脂聯(lián)素-減毒沙門(mén)氏菌的構(gòu)建及表達(dá)
        1 材料和方法
        2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3 討論
    第三部分 重組脂聯(lián)素蛋白對(duì)體外非酒精性脂肪性肝細(xì)胞模型的作用
        1 材料和方法
        2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3 討論
全文總結(jié)
參考文獻(xiàn)
附圖
文獻(xiàn)綜述
致謝
攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的論文



本文編號(hào)：3850474