成纖維細胞生長因子21(Fibroblast growth factor 21,FGF21)是成纖維細胞生長因子家族的新成員,是一種特異性作用于肝臟、胰島、和脂肪組織的新型代謝調(diào)控因子。FGF21具有降低機體血糖血脂、改善胰島素抵抗、保護胰島β細胞等多種糖脂代謝調(diào)控的功能,因此,其在2型糖尿病、肥胖、動脈粥樣硬化、脂肪肝等多種代謝綜合癥的臨床應(yīng)用方面極具潛力。 非酒精性脂肪肝病(Non-alcoholic fatty liver disease, NAFLD)是以肝小葉內(nèi)的肝實質(zhì)細胞脂肪變性、炎性細胞浸潤和脂肪沉積為主要病理表現(xiàn),但無伴隨過量飲酒史、病毒感染或其他病原體的一種代謝綜合癥,目前在臨床上尚無特效的NAFLD治療藥物。動物模型研究結(jié)果表明,FGF21能夠顯著降低血清中甘油三脂、膽固醇以及低密度脂蛋白的含量,顯示其具有治療NAFLD的潛能。本研究首先利用基因工程技術(shù)在大腸桿菌中高效表達可溶性重組人FGF21,并利用3T3-L1細胞測定重組蛋白的糖吸收活性。然后,通過建立NAFLD的動物模型,評估FGF21對NAFLD的治療作用,并探討其作用機制。 將含組氨酸標簽的fgf21基因...

【文章頁數(shù)】：126 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
目錄
第一章 前言
    1 成纖維細胞因子21的研究概況
        1.1 FGF21的結(jié)構(gòu)
        1.2 FGF21的生物學(xué)功能
        1.3 FGF21的臨床安全性與工程化現(xiàn)狀
    2 非酒精性脂肪肝
        2.1 NAFLD的發(fā)病機制
        2.2 NAFLD的治療現(xiàn)狀
        2.3 FGF21與NAFLD
    3 立題依據(jù)及設(shè)計思路
第二章 FGF21的克隆表達、純化及中試研究
    1 儀器與材料
    2 實驗方法
        2.1 基因的設(shè)計、擴增與克隆
        2.2 重組蛋白FGF21的表達分析
        2.3 重組蛋白的發(fā)酵工藝
        2.4 重組蛋白rhFGF21的純化鑒定
    3 實驗結(jié)果
        3.1 基因的設(shè)計、擴增與克隆
        3.2 重組蛋白的表達
        3.3 重組蛋白的中試發(fā)酵
        3.4 重組蛋白的純化與鑒定
    4 討論
第三章 重組人成纖維細胞因子21的體外活性測定
    1 儀器與材料
    2 實驗方法
        2.1 小鼠3T3-L1脂肪細胞培養(yǎng)及分化
        2.2 糖吸收活性測定實驗
        2.3 rhFGF21對3T3-L1脂肪細胞中GLUT1 mRNA表達的影響
        2.4 HepG2細胞培養(yǎng)
        2.5 促增殖活性測定
        2.6 FGF21對AKT抑制劑(LY294002)引起的細胞存活力變化的影響
        2.7 數(shù)據(jù)分析
    3 實驗結(jié)果
        3.1 3T3-L1分化為成熟的脂肪細胞
        3.2 rhFGF21對3T3-L1脂肪細胞的糖吸收促進作用
        3.3 rhFGF21對3T3-L1脂肪細胞GLUT1mRNA表達的影響
        3.4 rhFGF21對HepG2細胞的促增殖活性測定
        3.5 rhFGF21對LY294002引起的HepG2細胞存活力變化的影響
    4 討論
第四章 高脂飲食誘導(dǎo)的小鼠非酒精性脂肪肝模型的建立
    1 實驗儀器與材料
        1.1 實驗儀器
        1.2 實驗動物
        1.3 基礎(chǔ)飼料
        1.4 高脂飼料
    2 實驗方法
        2.1 實驗動物飼養(yǎng)和分組
        2.2 處死動物,留取標本
        2.3 胰島素含量測定和生化指標測定
        2.4 生化指標測定
        2.5 組織病理學(xué)檢測
        2.6 數(shù)據(jù)分析
    3 實驗結(jié)果
        3.1 體重及肝指數(shù)變化
        3.2 血清脂蛋白變化
        3.3 空腹胰島素含量及穩(wěn)態(tài)胰島素評價指數(shù)
        3.4 肝功能相關(guān)酶活改變
        3.5 肝臟的組織病理學(xué)改變
    4 討論
第五章 RHFGF21對小鼠非酒精性脂肪肝的治療作用及其機制研究
    1 實驗儀器與材料
        1.1 實驗儀器及試劑
        1.2 實驗動物
        1.3 基礎(chǔ)飼料
        1.4 高脂飼料
    2 實驗方法
        2.1 實驗動物飼養(yǎng)和分組
        2.2 實驗動物給藥
        2.3 處死動物,留取標本
        2.4 血清學(xué)指標測定
        2.5 肝臟甘油三酯和膽固醇含量測定
        2.6 組織病理學(xué)檢測
        2.7 rhFGF21對實驗動物肝臟氧化應(yīng)激水平的影響
        2.8 Western blot檢測肝組織中脂代謝相關(guān)蛋白的表達
        2.9 Real time RT-PCR檢測肝組織中相關(guān)基因的表達水平
        2.10 數(shù)據(jù)分析
    3 實驗結(jié)果
        3.1 實驗動物體重變化
        3.2 實驗小鼠的肝指數(shù)
        3.3 實驗動物的空腹血糖(FG)、空腹胰島素(FINS)和穩(wěn)態(tài)胰島素評價指數(shù)
        3.4 實驗動物的血脂測定結(jié)果
        3.5 實驗動物的肝功能相關(guān)酶活測定
        3.6 實驗動物的肝臟膽固醇、甘油三酯含量
        3.7 實驗動物肝組織病理檢查
        3.8 rhFGF21對實驗動物肝臟氧化應(yīng)激水平的影響
        3.9 rhFGF21對肝組織中脂代謝相關(guān)蛋白的表達影響
        3.10 rhFGF21對肝組織中脂代謝相關(guān)基因表達的影響
    4 討論
小結(jié)
參考文獻
附錄
    附錄一:各種試劑和培養(yǎng)基的配制
    附錄二:DNA測序結(jié)果圖
    附錄三:PMF圖譜
英文縮略詞表
博士期間發(fā)表論文
致謝



本文編號：3843905