目的:Smad3是肝纖維化進(jìn)程中的TGF-β/Smads途徑的一個重要蛋白,Smad3是介導(dǎo)TGF-β信號向細(xì)胞內(nèi)傳遞、活化肝星狀細(xì)胞的直接承擔(dān)者,在肝纖維化發(fā)展進(jìn)程中起著關(guān)鍵作用。本文以Smad3基因為研究對象,構(gòu)建篩選出該基因的有效siRNA干擾載體,并初步探討糖基轉(zhuǎn)移酶ppGalNAc-T家族與Smad3基因之間的相互關(guān)系。 方法:遵循RNA干擾目標(biāo)序列的選取原則,利用互聯(lián)網(wǎng)資源對Smad3基因mRNA序列設(shè)計三條可能的小干擾RNA(siRNA),分別將這三段siRNA插入到RNA干擾真核表達(dá)載體pRNAT-U6.1/Neo中構(gòu)建成三條干擾載體;脂質(zhì)體介導(dǎo)三條載體轉(zhuǎn)染至肝星狀細(xì)胞,采用RT-PCR的方法篩選出其中一條對Smad3抑制作用最佳的載體,RT-PCR和Western-Blot進(jìn)一步鑒定該載體對Smad3的抑制作用;接下來利用已構(gòu)建篩選出的pRNAT-SiSmad3轉(zhuǎn)染肝星狀細(xì)胞,建立Smad3的下調(diào)表達(dá)模型,檢測糖基轉(zhuǎn)移酶ppGalNAc-T家族的表達(dá)情況,同時利用本實驗室已經(jīng)構(gòu)建的干擾表達(dá)載體pSilenCircle-SiT2轉(zhuǎn)染入肝星狀細(xì)胞,建立下調(diào)表達(dá)ppGalN...

【文章頁數(shù)】：60 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
前言
第一部分 Smad3 基因小干擾 RNA 序列的設(shè)計 及其表達(dá)載體的構(gòu)建
    材料和方法
    結(jié)果
    討論
    參考文獻(xiàn)
第二部分 Smad3 有效 siRNA 表達(dá)載體篩選及鑒定
    材料和方法
    結(jié)果
    討論
    參考文獻(xiàn)
第三部分 Smad3 與糖基轉(zhuǎn)移酶 ppGalNacTs 相關(guān)性研究
    材料和方法
    結(jié)果
    討論
    參考文獻(xiàn)
小結(jié)
附錄一 中英文縮略對照表
附錄二 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的論文
本課題所獲的基金資助
附錄三 綜述:肝纖維化的研究進(jìn)展
    參考文獻(xiàn)
致謝



本文編號：3843455