發(fā)布時間：2023-08-25 22:51

　　目的:Smad3是肝纖維化進程中的TGF-β/Smads途徑的一個重要蛋白,Smad3是介導TGF-β信號向細胞內傳遞、活化肝星狀細胞的直接承擔者,在肝纖維化發(fā)展進程中起著關鍵作用。本文以Smad3基因為研究對象,構建篩選出該基因的有效siRNA干擾載體,并初步探討糖基轉移酶ppGalNAc-T家族與Smad3基因之間的相互關系。 方法:遵循RNA干擾目標序列的選取原則,利用互聯(lián)網資源對Smad3基因mRNA序列設計三條可能的小干擾RNA(siRNA),分別將這三段siRNA插入到RNA干擾真核表達載體pRNAT-U6.1/Neo中構建成三條干擾載體;脂質體介導三條載體轉染至肝星狀細胞,采用RT-PCR的方法篩選出其中一條對Smad3抑制作用最佳的載體,RT-PCR和Western-Blot進一步鑒定該載體對Smad3的抑制作用;接下來利用已構建篩選出的pRNAT-SiSmad3轉染肝星狀細胞,建立Smad3的下調表達模型,檢測糖基轉移酶ppGalNAc-T家族的表達情況,同時利用本實驗室已經構建的干擾表達載體pSilenCircle-SiT2轉染入肝星狀細胞,建立下調表達ppGalN...

【文章頁數(shù)】：60 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
前言
第一部分 Smad3 基因小干擾 RNA 序列的設計 及其表達載體的構建
    材料和方法
    結果
    討論
    參考文獻
第二部分 Smad3 有效 siRNA 表達載體篩選及鑒定
    材料和方法
    結果
    討論
    參考文獻
第三部分 Smad3 與糖基轉移酶 ppGalNacTs 相關性研究
    材料和方法
    結果
    討論
    參考文獻
小結
附錄一 中英文縮略對照表
附錄二 攻讀碩士學位期間發(fā)表的論文
本課題所獲的基金資助
附錄三 綜述:肝纖維化的研究進展
    參考文獻
致謝



本文編號：3843455