[目的]TGFβ/smad途徑是轉(zhuǎn)化生長因子β(transforming growth factor-β,TGFβ)發(fā)揮其作用最常見的途徑,在肝纖維化的啟動和肝星狀細(xì)胞的激活與轉(zhuǎn)化過程中起關(guān)鍵作用。沉默信息調(diào)節(jié)因子1(silent information regulator 1,SIRT1)是一種還原型輔酶I依賴的組蛋白脫乙�；鞍酌�,可通過抑制TGFβ影響肝纖維化的生理過程,但調(diào)控機制尚不明確,而研究SIRT1介導(dǎo)的TGFβ信號通路在肝纖維化中的調(diào)控機制,能為肝纖維化的治療提供科學(xué)依據(jù)。本文選擇經(jīng)高脂飲食誘導(dǎo)的肝纖維化川西亞種獼猴和大鼠肝星狀細(xì)胞(HSCT6),研究TGFβ/Smad信號通路上的相關(guān)因子:Smad7,磷酸化Smad3(phospho-Samd3),轉(zhuǎn)化生長因子β1(transforming growth factor-β1,TGFβ1),α-平滑肌肌動蛋白(SmoothMuscle Actin,α-SMA),以及SIRT1的水平變化,據(jù)此探討(1)肝纖維化進(jìn)程中SIRT對TGFβ/Smad通路的影響;(2)SIRT1介導(dǎo)的TGFβ信號通路在肝纖維化中的調(diào)控機制。[方法...

【文章頁數(shù)】：56 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略詞表
文獻(xiàn)綜述
    1 肝纖維化概況及發(fā)病機理
        1.1 肝纖維化診斷標(biāo)準(zhǔn)及治療方法
            1.1.1 肝纖維化臨床診斷
            1.1.2 肝纖維化的治療
        1.2 肝纖維化動物模型
        1.3 肝纖維化相關(guān)通路研究
            1.3.1 TGFβ/smad信號通路
            1.3.2 PDGF信號通路
            1.3.3 NF-κB信號通路
            1.3.4 Wnt途徑
    2 SIRT1概況與相關(guān)研究
        2.1 SIRT1的概況
        2.2 SIRT1與肝纖維化
        2.3 SIRT1與TGFβ/Smad信號通路
選題意義
論文實驗
    第一章: SIRT1及TGFβ/Smad通路相關(guān)因子在獼猴肝纖維化進(jìn)程中的表達(dá)
        1 實驗材料
            1.1 實驗動物
            1.2 實驗儀器
            1.3 耗材與試劑
            1.4 部分溶液配制
        2 實驗方法
            2.1 樣品采集
            2.2 切片制作
            2.3 MASSON染色及肝纖維化評價與分組
            2.4 病理組織學(xué)觀察
            2.5 血液生化指標(biāo)檢測
            2.6 免疫組織化學(xué)檢測SIRT1, Smad7, phospho-Smad3, TGFβ1和α-SMA
                2.6.1 免疫組織化學(xué)SABC法
                2.6.2 圖像分析及數(shù)據(jù)處理
            2.7 統(tǒng)計學(xué)分析
        3 實驗結(jié)果
            3.1 肝活檢組織病理變化
            3.2 獼猴血生化指標(biāo)
            3.3 肝活檢組織中SIRT1, Smad7, phospho-Smad3, TGFβ1和α-SMA免疫表達(dá)情況
        4 討論與分析
    第二章: SIRT1對TGFβ/Smad信號通路的調(diào)控
        1 實驗材料
            1.1 HSCT6細(xì)胞系
            1.2 實驗儀器
            1.3 耗材與試劑
            1.4 部分溶液配制
        2 實驗方法
            2.1 細(xì)胞培養(yǎng)及分組
            2.2 CCK8檢測細(xì)胞毒性
            2.3 實時熒光定量PCR檢測SIRT1,Smad7,Smad3,TGFβ1和α-SMA的基因表達(dá)量
                2.3.1 引物設(shè)計及用品處理
                2.3.2 細(xì)胞樣品處理及RNA提取
                2.3.3 去除基因組DNA及反轉(zhuǎn)錄
                2.3.4 Real-time PCR
            2.4 蛋白質(zhì)印跡法檢測SIRT1, Smad7, phospho-Smad3, TGFβ1和α-SMA的蛋白表達(dá)量
                2.4.1 細(xì)胞蛋白提取
                2.4.2 BCA蛋白質(zhì)濃度測定
                2.4.3 蛋白質(zhì)電泳
                2.4.4 免疫印跡
                2.4.5 數(shù)據(jù)分析
            2.5 統(tǒng)計學(xué)分析
        3 實驗結(jié)果
            3.1 CCK8細(xì)胞活性檢測結(jié)果
            3.2 熒光定量PCR檢測mRNA水平SIRT1,Smad7,Smad3, TGFβ1和α-SMA表達(dá)結(jié)果
            3.3 免疫印跡檢測SIRT1, Smad7, phospho-Smad3, TGFβ1和α-SMA蛋白表達(dá)結(jié)果
        4 討論與分析
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
作者簡歷



本文編號：3832205