乙型病毒性肝炎是一種世界性的傳染病,由乙型肝炎病毒(hepatitis B virus, HBV)感染所引起,是肝衰竭、肝硬化和肝癌發(fā)生的高危因素。HBV由于其多聚酶/反轉(zhuǎn)錄酶(RT)缺乏校對(duì)功能,極易發(fā)生變異,是高變異病毒,其內(nèi)部基本核心啟動(dòng)子(basal core promoter, BCP)基因序列的保守性對(duì)于維持病毒的活躍復(fù)制非常關(guān)鍵,該區(qū)變異可以影響HBV的復(fù)制力,降低病毒e抗原(hepatitis B e antigen, HBeAg)的合成,從而導(dǎo)致不同的臨床結(jié)局。目前,BCP區(qū)的熱點(diǎn)突變有T1753A/C、A1762T、G1764A、C1766T等,其中最為常見(jiàn)的是A1762T/G1764A雙聯(lián)突變,此外,C1766T/T1768A雙聯(lián)突變,以及A1762T/G1764A/C1766T和T1753C/A1762T/G1764A/C1766T等多聯(lián)突變也較為常見(jiàn)。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)對(duì)解放軍第302醫(yī)院近年收治的40例慢性乙型肝炎(chronic hepatitis B, CHB)患者及40例慢加急性肝衰竭(acute-on-chronic liver failure, ACLF)...

【文章頁(yè)數(shù)】：46 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1 引言
    1.1 乙型肝炎病毒概述
        1.1.1 HBV 的基因組結(jié)構(gòu)
        1.1.2 HBV 的生活周期
        1.1.3 HBV 的調(diào)控元件
    1.2 立論依據(jù)與意義
2 慢性乙型肝炎患者及慢加急性肝衰竭患者HBV 全基因克隆及序列分析
    2.1 研究對(duì)象
    2.2 實(shí)驗(yàn)試劑及主要儀器
    2.3 研究方法
        2.3.1 樣品的收集、處理和保存
        2.3.2 HBV DNA 的提取
        2.3.3 HBV 全基因組序列擴(kuò)增
        2.3.4 HBV DNA 的克隆
        2.3.5 HBV DNA 的測(cè)序及序列拼接
    2.4 結(jié)果分析
3 HBV 基本核心啟動(dòng)子突變對(duì)轉(zhuǎn)錄活性的影響
    3.1 實(shí)驗(yàn)試劑
    3.2 研究方法
        3.2.1 pGL3-BCP 雙熒光素酶表達(dá)載體的構(gòu)建
        3.2.2 重組載體的定點(diǎn)突變
        3.2.3 熒光素酶的檢測(cè)
    3.3 結(jié)果分析
4 HBV 基本核心啟動(dòng)子突變對(duì)全基因組復(fù)制力的影響
    4.1 實(shí)驗(yàn)試劑
    4.2 研究方法
        4.2.1 基因組定點(diǎn)突變
        4.2.2 細(xì)胞轉(zhuǎn)染
        4.2.3 轉(zhuǎn)染效率的監(jiān)測(cè)
        4.2.4 HBV DNA 復(fù)制力測(cè)定
    4.3 結(jié)果分析
5 討論與結(jié)論
    5.1 討論
    5.2 結(jié)論
致謝
參考文獻(xiàn)
作者簡(jiǎn)介



本文編號(hào)：3813123