目的:證實(shí)醛縮酶B作為乙型肝炎病毒主S蛋白結(jié)合蛋白一種候選蛋白,探討醛縮酶B生物學(xué)功能。 方法:(1)以人HEPG2細(xì)胞RNA為模板,用RT-PCR方法擴(kuò)增出ALDOB基因。將PCR產(chǎn)物克隆進(jìn)真核載體PCMV5內(nèi),構(gòu)建含ALDOB基因的重組真核表達(dá)質(zhì)粒。以實(shí)驗(yàn)室重組全S質(zhì)粒為模板,利用PCR擴(kuò)增主S蛋白基因,構(gòu)建PCMV4-Flag-主S基因表達(dá)質(zhì)粒,分別將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染293FT細(xì)胞,用免疫熒光和Western blot等方法檢測(cè)ALDOB及主S在293FT細(xì)胞中的表達(dá)。(2)將兩種質(zhì)粒共轉(zhuǎn)293T細(xì)胞,激光共聚焦試驗(yàn)明確主S蛋白和醛縮酶B空間定位。將主S基因表達(dá)質(zhì)粒穩(wěn)轉(zhuǎn)HepG2細(xì)胞,構(gòu)建主S穩(wěn)轉(zhuǎn)株,通過(guò)免疫共沉淀方法,驗(yàn)證主S蛋白與醛縮酶B相互結(jié)合。(3)構(gòu)建靶向醛縮酶B重組干擾質(zhì)粒siALDOB-Pu6,導(dǎo)入HEPG2細(xì)胞中,篩選出干擾質(zhì)粒的穩(wěn)轉(zhuǎn)株。通過(guò)細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)、Transwell實(shí)驗(yàn)、細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn),探討ALDOB在肝癌細(xì)胞HepG2生長(zhǎng)、侵襲、凋亡等方面的作用。 結(jié)果:(1)核酸序列分析的結(jié)果表明,克隆的ALDOB基因與主S基因在GenBank中分別與已登記基因序列100%...

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

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英文縮略詞表
中文摘要
英文摘要
前言
材料與試劑
實(shí)驗(yàn)方法
實(shí)驗(yàn)結(jié)果
討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
綜述
    參考文獻(xiàn)



本文編號(hào)：3810366