目的眾所周知,腸道是大體最大的“儲(chǔ)菌所”,在人體腸道內(nèi)寄生著500-1000種共計(jì)100萬億個(gè)細(xì)菌(這些細(xì)菌影響著人的消化能力和免疫功能,對人體的健康非常重要)。其中的革蘭氏陰性菌死亡的時(shí)候會(huì)釋放內(nèi)毒素,因此腸道也是人體最大的“內(nèi)毒素庫”。由腸源性內(nèi)毒素引發(fā)的急性肝損傷是臨床上導(dǎo)致肝臟功能衰竭的常見原因之一。LPS作為內(nèi)毒素的主要成分,通過腹腔注射到小鼠體內(nèi),能夠很好的模擬腸源性內(nèi)毒素發(fā)生感染的過程,而D-GalN能夠特異性的消耗肝臟內(nèi)的UTP,從而抑制相應(yīng)的核酸、蛋白質(zhì)等物質(zhì)的合成,最終導(dǎo)致肝細(xì)胞的損傷甚至死亡。LPS與D-GalN的聯(lián)合注射能夠特異性的造成肝臟的暴發(fā)性衰竭,是研究急性肝損傷的很好的動(dòng)物模型。自噬是一種在所有真核細(xì)胞中都穩(wěn)定存在的,以一種雙分子膜包裹著細(xì)胞質(zhì)成分成為自噬體,隨后這些結(jié)構(gòu)和溶酶體融合,遞送的“貨物”被降解和回收的過程,是對發(fā)育、分化、生存以及穩(wěn)態(tài)起重要作用的胞內(nèi)途徑。在過去的十多年中,其在人類疾病中的作用被廣泛關(guān)注。最近數(shù)據(jù)表明自噬參與多種肝臟疾病的發(fā)生。然而關(guān)于自噬在急性肝損傷中的作用的報(bào)道卻很少而且結(jié)果也不一致。渥曼青霉素是一種自繩狀青霉中分離出來的...

【文章頁數(shù)】：85 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
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符號說明
前言
    一、內(nèi)毒素(LPS)的生物學(xué)作用
    二、腸源性內(nèi)毒素與肝損傷
    三、自噬與肝損傷
    四、渥曼青霉素和肝損傷
    五、脂多糖/D-半乳糖胺誘導(dǎo)的小鼠急性肝損傷模型和研究目的
材料
    一、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
    二、RT-PCR試劑
    三、Western blot試劑
    四、免疫組織化學(xué)/熒光染色試劑
    五、其它試劑及主要耗材
    六、實(shí)驗(yàn)儀器
方法
    一、內(nèi)毒素誘導(dǎo)小鼠急性肝損傷動(dòng)物模型的建立
    二、血清的采集及肝功能的測定
    三、血清中炎性因子的流式測定
    四、酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA)
    五、免疫組織化學(xué)(IHC)染色實(shí)驗(yàn)
    六、蘇木素伊紅(HE)染色
    七、末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的dUTP缺口末端標(biāo)記(TUNEL)染色
    八、免疫組織熒光(IF)染色實(shí)驗(yàn)
    九、RT-PCR實(shí)驗(yàn)
    十、免疫蛋白印跡(Western blot)實(shí)驗(yàn)
    十一、一步法提取組織的蛋白質(zhì)、RNA、DNA
    十二、數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
結(jié)果
    一、脂多糖/D-半乳糖胺誘導(dǎo)小鼠的急性肝損傷,造成肝組織的壞死和凋亡
    二、在脂多糖/D-半乳糖胺導(dǎo)致小鼠急性肝損傷過程中肝組織中自噬水平升高
    三、在脂多糖/D-半乳糖胺誘導(dǎo)的小鼠急性肝損傷中炎性細(xì)胞因子分泌增加
    四、渥曼青霉素預(yù)處理能夠減輕脂多糖/D-半乳糖胺誘導(dǎo)的小鼠急性肝損傷過程中肝臟的損傷程度,抑制炎性細(xì)胞因子的分泌
    五、渥曼青霉素預(yù)處理能夠抑制脂多糖/D-半乳糖胺誘導(dǎo)的小鼠急性肝損傷過程中肝組織自噬水平的升高
    六、渥曼青霉素預(yù)處理能夠抑制脂多糖/D-半乳糖胺誘導(dǎo)的小鼠急性肝損傷過程中肝組織內(nèi)MAPK和NF-κB通路的活化
討論
小結(jié)
附圖表
參考文獻(xiàn)
致謝
攻讀碩學(xué)位期間發(fā)表論文及編著目錄
附件



本文編號：3803071