DC是專職的抗原提呈細胞,是連接天然免疫與獲得性免疫的橋梁,是平衡免疫應(yīng)答與免疫耐受的關(guān)鍵。作為免疫系統(tǒng)的前沿哨兵,受到病原體或炎癥信號的刺激后,DCs進行復(fù)雜的成熟過程,從而影響免疫應(yīng)答的質(zhì)與量。本研究旨在觀察重型乙型肝炎(ACLF)患者外周血樹突狀細胞兩個亞群(mDC和pDC)的頻率,單核細胞衍生的樹突狀細胞(MoDC)表型及刺激同種異體T淋巴細胞增殖能力的變化。 篩選重型乙型肝炎(ACLF)患者60例,慢性乙型病毒性肝炎(CHB)患者40例,并以20例健康者作對照,取入選研究對象的抗凝全血,應(yīng)用流式細胞術(shù)檢測外周血循環(huán)中mDC和pDC分別占外周血單個核細胞(PBMC)的比例。抗凝全血通過淋巴細胞分離液進行密度梯度法離心,分出PBMC,并進一步經(jīng)免疫磁珠陽性選擇的方法分離單核細胞,細胞因子白介素4和粒細胞巨噬細胞集落刺激因子體外誘導(dǎo)為MoDC,經(jīng)poly(I:C)刺激后,用流式細胞儀檢測MoDC的表型(HLA-DR、CD83、CD80、CD86),并通過同種混合淋巴細胞反應(yīng)(MLR)檢測MoDC刺激同種異體T淋巴細胞增殖的能力。 1、健康對照組mDC和pDC占PBMC百分率分別為0...

【文章頁數(shù)】：110 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
目錄
縮略詞表
摘要
ABSTRACT
前言
    1、重型乙型肝炎發(fā)病機制的現(xiàn)狀研究
    2、樹突狀細胞與模式識別受體
    3、Toll樣受體
    4、科研設(shè)想
    5、研究的目的及意義
第一部分 重型乙型肝炎患者外周血樹突狀細胞頻率、表型、功能變化
    一、引言
    二、材料與方法
        1 基本臨床材料
        2 儀器與試劑
        3 檢測外周血中mDC和pDC的比例
        4 外周血單個核細胞(PBMC)的分離
        5 細胞磁性分離系統(tǒng)分離單核細胞和CD4+T細胞
        6 流式細胞術(shù)驗證檢測分離的單核細胞及CD4+T細胞
        7 單核細胞體外誘導(dǎo)分化為樹突狀細胞
        8 流式細胞術(shù)檢測MoDC表面分子的表達
        9 混合淋巴細胞反應(yīng)
        10 統(tǒng)計學(xué)方法
    三、結(jié)果
        1 基本臨床資料
        2 mDC和pDC數(shù)量的變化
        3 單核細胞衍生的DC(MoDC)形態(tài)特點
        4 MoDC的細胞表型鑒定分析
        5 MoDC刺激T細胞增殖能力
    四、討論
    五、小結(jié)
第二部分 重型乙型肝炎患者外周血樹突狀細胞TLR3信號通路的變化研究
    一、引言
    二、材料與方法
        1 臨床資料
        2 儀器與試劑
        3 單核細胞衍生的樹突狀細胞(MoDC)體外誘導(dǎo)培養(yǎng)
        4 流式細胞儀檢測MoDC上TLR3的表達
        5 總RNA提取
        6 cDNA第一鏈的合成
        7 實時熒光定量PCR(Real-time Quantitative PCR)
        8 瓊脂糖凝膠電泳
        9 免疫印跡法(Western blotting)測定TLR3的表達量
        10 液相蛋白流式檢測
        11 ELISA檢測DCs培養(yǎng)上清液中IFN-β的表達水平
        12 統(tǒng)計學(xué)方法
    三、結(jié)果
        1 DC上TLR3的表達
        2 TLR3信號通路上關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子的表達
        3 MoDC分泌促炎性因子水平
        4 MoDC分泌IFN-β水平
    四、討論
    五、小結(jié)
全文總結(jié)
    結(jié)論
    創(chuàng)新點
    研究展望
正文參考文獻
綜述
綜述參考文獻
后記
    在讀期間撰寫於發(fā)表的論文
    參與國際會議交流
    在讀期間獲獎情況
    致謝



本文編號：3800109