目的:利用低速離心和差速貼壁的特性,探討一種高效的BALB/c小鼠原代Kupffer細(xì)胞(Kupffer cells,KC)分離純化方法,為進(jìn)一步研究KC在肝臟疾病中的作用奠定良好的基礎(chǔ)。方法:0.1%IV型膠原蛋白酶分階段(原位灌注和水浴振蕩)消化肝臟組織形成單細(xì)胞懸液,低速離心肝臟單細(xì)胞懸液初步分離KC,結(jié)合差速貼壁培養(yǎng)進(jìn)一步純化KC;本方法與傳統(tǒng)的密度梯度法比較分離的KC數(shù)量和細(xì)胞活性;應(yīng)用F4/80免疫熒光染色鑒定本法提取細(xì)胞的形態(tài)學(xué)特征、流式細(xì)胞術(shù)檢測提取細(xì)胞分子標(biāo)志物(F4/80)的表達(dá)、墨汁吞噬實驗進(jìn)行KC吞噬功能鑒定;構(gòu)建KC缺氧/復(fù)氧模型,流式細(xì)胞術(shù)檢測主要組織相容性復(fù)合體(MHC)Ⅱ、CD40、CD68和CD86的表達(dá),ELISA檢測腫瘤壞死因子α(TNF-α)的表達(dá)。結(jié)果:單只BALB/c小鼠用傳統(tǒng)的Percoll密度梯度法可獲得(2.19±0.43)×106個KC,細(xì)胞存活率(90.2±3.7)%。單只BALB/c小鼠肝臟用本法可獲得(5.83±0.54)×106個KC,細(xì)胞存活率達(dá)(92.3±2.7)%,在提取數(shù)量上本法顯著優(yōu)于傳統(tǒng)的Percoll密度梯度法;...

【文章頁數(shù)】：40 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
英漢縮略語名詞對照
中文摘要
英文摘要
前言
1 材料與方法
2 結(jié)果
3 討論
全文總結(jié)
參考文獻(xiàn)
文獻(xiàn)綜述
    參考文獻(xiàn)
致謝
攻讀學(xué)位期間發(fā)表的論文



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