胃出血是常見的危重消化道疾病,由于胃出血點所處環(huán)境特殊,強酸性的胃液和高活性的胃蛋白酶使凝血酶無法發(fā)揮作用,因此,抑制胃蛋白酶活性為治療該類疾病的關(guān)鍵;此外,胃出血患者血清中的胃蛋白酶含量遠(yuǎn)高于正常人,用特異性的結(jié)合物檢測血清胃蛋白酶變化,亦是臨床無痛診斷胃出血疾病的有效手段。核酸類適配子為一些具有高級結(jié)構(gòu)的單鏈DNA或RNA的寡核苷酸鏈,因其性質(zhì)穩(wěn)定、以高特異性和高親和力與靶物質(zhì)結(jié)合,目前已在臨床上用于診斷和治療各種疾病。本文旨在利用指數(shù)富集配基系統(tǒng)的進(jìn)化技術(shù)(Systematic evolution of ligands by exponential enrichment,SELEX),將與磁珠偶聯(lián)的胃蛋白酶作為靶分子,從體外80 nt(nucleotide)的隨機寡核苷酸(DNA)文庫中,篩選鑒定出與胃蛋白酶特異性結(jié)合的適配子:然后將適配子上標(biāo)記生物素分子,建立胃蛋白酶的ELADA(Enzyme-linked aptamer direct assay)檢測方法;并篩選出抑制胃蛋白酶功能位點適配子,為胃出血癥的臨床診斷和應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。研究結(jié)果如下:1.將1mg/mL胃蛋白酶包被于D...

【文章頁數(shù)】：61 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRAST
英文縮略詞表( Abbreviations)
一. 文獻(xiàn)綜述
    1 胃蛋白酶
    2 核酸適配子
        2.1 核酸適配子結(jié)構(gòu)
    3 核酸適配子的篩選
        3.1 SELEX技術(shù)的基本步驟
        3.2 SELEX技術(shù)的發(fā)展
    4 核酸適配子的應(yīng)用與發(fā)展
        4.1 核酸適配子的優(yōu)勢
        4.2 核酸適配子的應(yīng)用
        4.3 核酸適配子發(fā)展
        4.4 核酸適配子的展望
    5 論文研究的目的及意義
1 材料與方法
    1.1 材料
    1.2 實驗方法
    1.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計
2 實驗結(jié)果
    2.1 寡聚核苷酸文庫及dsDNA位置確定
    2.2 對稱PCR擴增反應(yīng)條件優(yōu)化
    2.3 不對稱PCR擴增反應(yīng)條件優(yōu)化
    2.4 磁珠偶聯(lián)胃蛋白酶
    2.5 各輪篩選參數(shù)
    2.6 ssDNA富集庫與胃蛋白酶的結(jié)合率
    2.7 質(zhì)粒抽提結(jié)果
    2.8 一級結(jié)構(gòu)同源性分析
    2.9 二級結(jié)構(gòu)構(gòu)建
    2.10 適配子對胃蛋白酶比活力的影響
    2.11 適配子對胃蛋白酶的結(jié)合特異性鑒定
3 討論
4 總結(jié)與展望
參考文獻(xiàn)
在學(xué)期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文與研究結(jié)果
致謝



本文編號：3795301