目的:炎癥性腸病(inflammatory bowel diseases,IBD)的發(fā)病機制與腸上皮屏障破壞有關(guān)。研究表明,腫瘤壞死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)在IBD患者結(jié)腸組織中表達顯著升高,可通過激活肌球蛋白輕鏈激酶(myosin light chain kinase,MLCK)通路破壞結(jié)腸上皮緊密連接結(jié)構(gòu),進而加重結(jié)腸上皮屏障的破壞。高脂食物的攝入是加重IBD發(fā)生的一個重要因素。前期研究報導(dǎo),高脂飲食通過破壞結(jié)腸上皮屏障加重IBD病理發(fā)展。高脂飲食也可增加TNF-α以及NADPH氧化酶的表達進而促進活性氧(reactive oxygen species,ROS)生成。然而,高脂飲食在IBD病理發(fā)展中的具體作用機制仍有待進一步闡明。流行病學研究發(fā)現(xiàn),維生素D攝入不足是IBD發(fā)生、發(fā)展的潛在危險因素。給予IBD模型小鼠維生素D類似物帕立骨化醇(Paricalcitol,PAL)處理可有效抑制MLCK通路活化,抑制結(jié)腸上皮屏障的破壞。然而高脂環(huán)境下維生素D對IBD病理發(fā)展的作用機制研究甚少。因此,本研究旨在揭示高脂飲食加重IBD病理發(fā)展的潛在機...

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【學位級別】：博士

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摘要
ABSTRACT
英文縮略語
第一部分 :高脂飲食誘導(dǎo)小鼠結(jié)腸氧化應(yīng)激破壞結(jié)腸上皮屏障
    1 前言
    2 材料與方法
        2.1 儀器與試劑
            2.1.1 主要材料與試劑
            2.1.2 主要儀器與器材
        2.2 實驗方法與步驟
            2.2.1 動物模型建立
            2.2.2 血糖測定
            2.2.3 血漿FFA測定
            2.2.4 血漿甘油三酯和膽固醇測定
            2.2.5 結(jié)腸甘油三酯和膽固醇測定
            2.2.6 H&E染色
            2.2.7 免疫熒光染色
            2.2.8 尤斯灌流實驗
            2.2.9 FITC右旋糖酐滲透性實驗
            2.2.10 蛋白濃度測定
            2.2.11 Western blot實驗
            2.2.12 Real-time PCR實驗
            2.2.13 TEM實驗
            2.2.14 ROS測定
        2.3 統(tǒng)計分析
    3 結(jié)果
        3.1 1周高脂飲食對小鼠結(jié)腸炎癥狀影響不明顯
        3.2 4周高脂小鼠模型建立
        3.3 4周高脂飲食加重小鼠結(jié)腸炎癥狀
        3.4 高脂加重小鼠結(jié)腸上皮屏障的破壞
        3.5 高脂增加小鼠結(jié)腸氧化應(yīng)激
    4 討論
    5 結(jié)論
第二部分 :維生素D類似物抑制高脂小鼠結(jié)腸上皮屏障的破壞
    1 前言
    2 材料與方法
        2.1 儀器與試劑
            2.1.1 主要材料與試劑
            2.1.2 主要儀器與器材
        2.2 實驗方法與步驟
            2.2.1 動物模型建立
            2.2.2 H&E染色
            2.2.3 FITC右旋糖酐滲透性實驗
            2.2.4 蛋白濃度測定
            2.2.5 Western blot實驗
            2.2.6 Real-time PCR實驗
        2.3 統(tǒng)計分析
    3 結(jié)果
        3.1 高脂飲食降低小鼠結(jié)腸上皮VDR表達
        3.2 PAL減輕高脂小鼠結(jié)腸炎癥狀
        3.3 PAL抑制高脂小鼠結(jié)腸上皮屏障的破壞
        3.4 PAL抑制高脂小鼠結(jié)腸氧化應(yīng)激
    4 討論
    5 結(jié)論
第三部分 :高脂加重細胞氧化應(yīng)激破壞結(jié)腸上皮細胞屏障以及維生素D抑制高脂環(huán)境下結(jié)腸上皮細胞屏障的破壞
    1 前言
    2 材料與方法
        2.1 儀器與試劑
            2.1.1 主要材料與試劑
            2.1.2 主要儀器與器材
        2.2 實驗方法與步驟
            2.2.1 細胞培養(yǎng)
            2.2.2 培養(yǎng)基配置
            2.2.3 細胞給藥及分組
            2.2.4 蛋白濃度測定
            2.2.5 Western blot實驗
            2.2.6 ROS活性測定
            2.2.7 免疫熒光染色
            2.2.8 細胞跨上皮電阻實驗
            2.2.9 細胞線粒體跨膜電位實驗
        2.3 統(tǒng)計分析
    3 結(jié)果
        3.1 高脂加重結(jié)腸上皮細胞屏障的破壞
        3.2 高脂加重結(jié)腸上皮細胞氧化應(yīng)激
        3.3 ROS抑制劑減輕結(jié)腸上皮細胞屏障的破壞
        3.4 維生素D抑制高脂環(huán)境下結(jié)腸上皮細胞氧化應(yīng)激
        3.5 維生素D抑制高脂環(huán)境下結(jié)腸上皮細胞屏障的破壞
    4 討論
    5 結(jié)論
本研究創(chuàng)新性自我評價
參考文獻
綜述
    參考文獻
攻讀學位期間取得的研究成果
致謝
個人簡介



本文編號：3789997