肝纖維化（hepatic fibrosis,HF）是一組非常常見的慢性肝疾病的病理學(xué)綜合征。在整個(gè)肝纖維化的發(fā)生發(fā)展過程中，肝細(xì)胞內(nèi)會(huì)發(fā)現(xiàn)許多基因的發(fā)生異常表達(dá)，并增加發(fā)展為肝細(xì)胞性癌的危險(xiǎn)性。在肝纖維化的發(fā)生過程中，肝星狀細(xì)胞（hepatic stellate cells, HSCs）的活化增殖是其中的一個(gè)重要環(huán)節(jié)。肝星狀細(xì)胞位于竇周Disse間隙內(nèi)，在正常狀態(tài)下，HSC主要儲(chǔ)存和代謝維生素A，合成與分泌少量的細(xì)胞外基質(zhì)（extracellular matrix,ECM）。當(dāng)HSC受刺激過度激活時(shí)，轉(zhuǎn)變成具有增生活性的、產(chǎn)生纖維的具收縮特性的肌成纖維細(xì)胞并表達(dá)α平滑肌肌動(dòng)蛋白（Alpha smooth muscle actin，α-SMA）合成異常增多的ECM超過肝清除能力導(dǎo)致其在肝內(nèi)聚集是肝纖維化形成的重要機(jī)制。有研究表明適當(dāng)濃度的脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)可刺激HSC，使其提高增殖率和表達(dá)細(xì)胞內(nèi)膠原增強(qiáng)。LPS誘導(dǎo)的細(xì)胞模型能夠較好地模擬出肝纖維化形成過程中HSC在數(shù)量和功能方面的主要改變，為HSC活化的研究提供了一個(gè)較為全面的細(xì)胞模型。 小泛素相關(guān)修...

【文章頁(yè)數(shù)】：54 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
中英文縮略詞表
第1章 引言
第2章 不同濃度 LPS 刺激 HSC-T6 SUMO-1 的表達(dá)水平變化
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞
        2.1.2 主要試劑
        2.1.3 主要儀器
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.0 器材的滅菌和去 RNA 酶
        2.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        2.2.2 相關(guān)液體的配制
        2.2.3 實(shí)驗(yàn)分組及細(xì)胞處理
        2.2.4 real-time PCR 檢測(cè) SUMO-1 mRNA 表達(dá)
        2.2.5 Western blot 檢測(cè)各組織蛋白的表達(dá)
        2.2.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
    2.3 結(jié)果
        2.3.1 Real time-PCR 結(jié)果
        2.3.2 Western blot 檢測(cè)結(jié)果
    2.4 討論
第3章 SUMO-1 表達(dá)變化后對(duì) HSC-T6 增殖的影響及其機(jī)制研究
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.1 細(xì)胞株
        3.1.2 主要試劑
        3.1.3 主要儀器
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 器材的滅菌和去 RNA 酶
        3.2.2 細(xì)胞培養(yǎng)
        3.2.3 慢病毒載體的構(gòu)建
        3.2.4 慢病毒轉(zhuǎn)染 HSC-T619
        3.2.5 利用定量 PCR 檢測(cè)轉(zhuǎn)染沉默、過表達(dá) SUMO-1 以及各對(duì)照組慢病毒后的 SUMO-1 表達(dá)水平
        3.2.6 利用 Western blot 實(shí)驗(yàn)檢測(cè)各組蛋白的表達(dá)水平
        3.2.7 利用流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期及細(xì)胞凋亡
        3.2.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
    3.3 結(jié)果
        3.3.1 熒光定量 PCR 結(jié)果分析
        3.3.2 Western blot 結(jié)果分析
        3.3.3 流式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)果
        3.3.4 小結(jié)
        3.3.5 在干擾 SUMO-1 表達(dá)水平的情況下 SUMO-2 及 SUMO-3 的變化
    3.4 討論
第4章 結(jié)論
致謝
參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間的研究成果
綜述
    參考文獻(xiàn)



本文編號(hào)：3785459