目的:探討RhoA/ROCK信號通路在TGF-β1誘導的大鼠腹膜間皮細胞(RPMCs)轉分化中的作用。 方法:(1)采用腹腔注射胰蛋白酶法,分離培養(yǎng)SD大鼠原代腹膜間皮細胞,經(jīng)倒置相差顯微鏡和免疫組織化學染色(Immunohistochemistry,IHC)鑒定;(2)常規(guī)傳代,取第二代腹膜間皮細胞用于實驗,培養(yǎng)的細胞靜止24h后,隨機分為正常對照組和TGF-β1(10ng/ml)刺激組兩組,分別用半定量RT-PCR、Western Blot和間接免疫熒光(Immunofluorescence,IF)法觀察不同時間α-平滑肌肌動蛋白(α-SMA),E-鈣黏蛋白(E-cadherin)、膠原Ⅰ(CollagenⅠ)、波形蛋白(Vimentin)以及RhoA(包括總RhoA及活化的RhoA)mRNA和/或蛋白的表達;(3)取第二代融合后的腹膜間皮細胞,靜止24h后隨機分為以下4組:正常對照組,TGF-β1(10ng/ml)刺激組,TGF-β1(10ng/ml)+Y-27632(ROCK特異性抑制劑,10μM)組,Y-27632(10μM)組,分別用半定量RT-PCR、Western Bl...

【文章頁數(shù)】：67 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
縮略詞簡表
第一章 前言
第二章 材料與方法
    2.1 材料
        2.1.1 動物及來源
        2.1.2 主要儀器
        2.1.3 主要試劑
    2.2 實驗方法
        2.2.1 大鼠原代腹膜間皮細胞的分離與培養(yǎng)
        2.2.2 細胞傳代
        2.2.3 免疫組織化學方法鑒定腹膜間皮細胞
        2.2.4 腹膜間皮細胞的活力測定
        2.2.5 腹膜間皮細胞增殖實驗
        2.2.6 實驗分組
        2.2.7 RT-PCR檢測
        2.2.8 Western Blot
        2.2.9 膜蛋白的提取
        2.2.10 間接免疫熒光檢測E-cadherin、α-SMA和CollagenⅠ的表達
    2.3 統(tǒng)計學處理
第三章 實驗結果
    3.1 大鼠原代腹膜間皮細胞的鑒定
    3.2 大鼠原代腹膜間皮細胞活力測定
    3.3 大鼠原代腹膜間皮細胞增殖實驗結果
    3.4 RNA的檢測
    3.5 TGF-β1誘導大鼠腹膜間皮細胞RhoA活化
    3.6 TGF-β1對大鼠腹膜間皮細胞轉分化的影響
        3.6.1 RPMCs形態(tài)改變
        3.6.2 TGF-β1對E-cadherin表達的影響
        3.6.3 TGF-β1對α-SMA表達的影響
        3.6.4 TGF-β1對Vimentin蛋白表達的影響
        3.6.5 TGF-β1對CollagenⅠ表達的影響
    3.7 Y-27632對大鼠腹膜間皮細胞轉分化的影響
        3.7.1 E-cadherin的表達
        3.7.2 α-SMA的表達
        3.7.3 Vimentin蛋白的表達
        3.7.4 CollagenⅠ的表達
第四章 討論
    4.1 腹膜間皮細胞轉分化
    4.2 RhoA/ROCK信號通路影響腹膜纖維化的可能機制
第五章 結論
參考文獻
綜述
致謝
攻讀學位期間的主要研究成果



本文編號：3783391