目的:探討RhoA/ROCK信號(hào)通路在TGF-β1誘導(dǎo)的大鼠腹膜間皮細(xì)胞(RPMCs)轉(zhuǎn)分化中的作用。 方法:(1)采用腹腔注射胰蛋白酶法,分離培養(yǎng)SD大鼠原代腹膜間皮細(xì)胞,經(jīng)倒置相差顯微鏡和免疫組織化學(xué)染色(Immunohistochemistry,IHC)鑒定;(2)常規(guī)傳代,取第二代腹膜間皮細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn),培養(yǎng)的細(xì)胞靜止24h后,隨機(jī)分為正常對(duì)照組和TGF-β1(10ng/ml)刺激組兩組,分別用半定量RT-PCR、Western Blot和間接免疫熒光(Immunofluorescence,IF)法觀察不同時(shí)間α-平滑肌肌動(dòng)蛋白(α-SMA),E-鈣黏蛋白(E-cadherin)、膠原Ⅰ(CollagenⅠ)、波形蛋白(Vimentin)以及RhoA(包括總RhoA及活化的RhoA)mRNA和/或蛋白的表達(dá);(3)取第二代融合后的腹膜間皮細(xì)胞,靜止24h后隨機(jī)分為以下4組:正常對(duì)照組,TGF-β1(10ng/ml)刺激組,TGF-β1(10ng/ml)+Y-27632(ROCK特異性抑制劑,10μM)組,Y-27632(10μM)組,分別用半定量RT-PCR、Western Bl...

【文章頁(yè)數(shù)】：67 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
縮略詞簡(jiǎn)表
第一章 前言
第二章 材料與方法
    2.1 材料
        2.1.1 動(dòng)物及來(lái)源
        2.1.2 主要儀器
        2.1.3 主要試劑
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 大鼠原代腹膜間皮細(xì)胞的分離與培養(yǎng)
        2.2.2 細(xì)胞傳代
        2.2.3 免疫組織化學(xué)方法鑒定腹膜間皮細(xì)胞
        2.2.4 腹膜間皮細(xì)胞的活力測(cè)定
        2.2.5 腹膜間皮細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)
        2.2.6 實(shí)驗(yàn)分組
        2.2.7 RT-PCR檢測(cè)
        2.2.8 Western Blot
        2.2.9 膜蛋白的提取
        2.2.10 間接免疫熒光檢測(cè)E-cadherin、α-SMA和CollagenⅠ的表達(dá)
    2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
第三章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    3.1 大鼠原代腹膜間皮細(xì)胞的鑒定
    3.2 大鼠原代腹膜間皮細(xì)胞活力測(cè)定
    3.3 大鼠原代腹膜間皮細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    3.4 RNA的檢測(cè)
    3.5 TGF-β1誘導(dǎo)大鼠腹膜間皮細(xì)胞RhoA活化
    3.6 TGF-β1對(duì)大鼠腹膜間皮細(xì)胞轉(zhuǎn)分化的影響
        3.6.1 RPMCs形態(tài)改變
        3.6.2 TGF-β1對(duì)E-cadherin表達(dá)的影響
        3.6.3 TGF-β1對(duì)α-SMA表達(dá)的影響
        3.6.4 TGF-β1對(duì)Vimentin蛋白表達(dá)的影響
        3.6.5 TGF-β1對(duì)CollagenⅠ表達(dá)的影響
    3.7 Y-27632對(duì)大鼠腹膜間皮細(xì)胞轉(zhuǎn)分化的影響
        3.7.1 E-cadherin的表達(dá)
        3.7.2 α-SMA的表達(dá)
        3.7.3 Vimentin蛋白的表達(dá)
        3.7.4 CollagenⅠ的表達(dá)
第四章 討論
    4.1 腹膜間皮細(xì)胞轉(zhuǎn)分化
    4.2 RhoA/ROCK信號(hào)通路影響腹膜纖維化的可能機(jī)制
第五章 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
綜述
致謝
攻讀學(xué)位期間的主要研究成果



本文編號(hào)：3783391