過量飲酒會引起廣泛的肝臟疾病,如脂肪性肝炎、肝纖維化、肝硬化和肝癌。特別是酒精性肝病(alcoholic live disease,ALD),已引起廣泛關(guān)注。本文以來源于海馬的兩種多肽為實驗原料,考察了兩種海馬多肽的活性,研究了SHP-1(VSIADSKA,Val-Ser-Ile-Ala-Asp-Ser-Lys-Ala)和SHP-2(ENANGP,Glu-Asn-Ala-Asn-Gly-Pro)對人肝癌細(xì)胞(HepG2)酒精性損傷的保護作用及其機制,為海馬多肽在ALD的預(yù)防和治療中提供了理論基礎(chǔ)。主要研究內(nèi)容及結(jié)果如下:1、采用MTT實驗測定細(xì)胞活力。實驗結(jié)果表明,酒精的最佳作用濃度為0.75 M;在10-100μM濃度范圍內(nèi),兩種多肽對細(xì)胞均無毒害作用;與酒精損傷組(對照組)相比,在10-100μM時,細(xì)胞相對活力明顯增強,且呈濃度依賴性。這說明兩種海馬多肽對酒精誘導(dǎo)的HepG2細(xì)胞損傷均具有保護作用。2、采用DCFH-DA法檢測細(xì)胞內(nèi)ROS的含量。實驗結(jié)果表明,與對照組相比,兩種海馬多肽都減少了細(xì)胞內(nèi)ROS的含量,即海馬多肽可有效抑制ROS的生成。3、采用SOD、GSH和GGT檢測...

【文章頁數(shù)】：68 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
1 緒論
    1.1 研究背景
        1.1.1 酒精性肝病
        1.1.2 氧化應(yīng)激
        1.1.3 細(xì)胞凋亡
        1.1.4 抗氧化劑
    1.2 海馬的研究
        1.2.1 海馬的介紹
        1.2.2 海馬的主要化學(xué)成分
        1.2.3 海馬的藥理活性
    1.3 技術(shù)路線
    1.4 研究目的和意義
2 兩種海馬多肽對酒精誘導(dǎo)的HEPG2 細(xì)胞損傷的保護作用
    2.1 實驗材料與儀器
        2.1.1 實驗材料
        2.1.2 實驗試劑
        2.1.3 儀器與設(shè)備
    2.2 實驗方法
        2.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        2.2.2 酒精濃度篩選
        2.2.3 樣品毒性實驗
        2.2.4 海馬多肽對酒精誘導(dǎo)HepG2 細(xì)胞損傷的保護作用
        2.2.5 數(shù)據(jù)處理
    2.3 結(jié)果與分析
        2.3.1 酒精濃度對HepG2 細(xì)胞活力的影響
        2.3.2 海馬多肽對細(xì)胞活力的影響
        2.3.3 海馬多肽對酒精誘導(dǎo)HepG2 細(xì)胞損傷的保護作用
    2.4 討論
3 兩種海馬多肽對酒精誘導(dǎo)HEPG2 細(xì)胞產(chǎn)生氧化應(yīng)激損傷的保護作用
    3.1 實驗材料與儀器
        3.1.1 實驗材料
        3.1.2 實驗試劑
        3.1.3 實驗儀器
        3.1.4 主要溶液配制
    3.2 實驗方法
        3.2.1 HepG2 細(xì)胞內(nèi)ROS的測定
        3.2.2 HepG2 細(xì)胞內(nèi)SOD含量的測定
        3.2.3 HepG2 細(xì)胞內(nèi)GSH含量的測定
        3.2.4 HepG2 細(xì)胞內(nèi)GGT含量的測定
        3.2.5 Western blot檢測HepG2 細(xì)胞內(nèi)SOD、GSH和 GGT蛋白的表達(dá)情況
        3.2.6 數(shù)據(jù)處理
    3.3 結(jié)果與分析
        3.3.1 海馬多肽對HepG2 細(xì)胞內(nèi)ROS含量的影響
        3.3.2 海馬多肽對HepG2 細(xì)胞內(nèi)SOD含量的影響
        3.3.3 海馬多肽對HepG2 細(xì)胞內(nèi)GSH含量的影響
        3.3.4 海馬多肽對HepG2 細(xì)胞內(nèi)GGT含量的影響
        3.3.5 海馬多肽對HepG2 細(xì)胞內(nèi)SOD、GSH和 GGT蛋白表達(dá)的影響
    3.4 討論
4 兩種海馬多肽對HEPG2 細(xì)胞凋亡通路的調(diào)控
    4.1 實驗材料與儀器
        4.1.1 實驗材料
        4.1.2 實驗試劑
        4.1.3 實驗儀器
        4.1.4 主要溶液配制
    4.2 實驗方法
        4.2.1 海馬多肽對細(xì)胞形態(tài)的影響
        4.2.2 Western blot實驗檢測細(xì)胞內(nèi)與凋亡相關(guān)的蛋白的表達(dá)情況
        4.2.3 海馬多肽對Akt和 NF-κB信號通路的影響
        4.2.4 免疫熒光法檢測海馬多肽對HepG2 細(xì)胞內(nèi)p65 蛋白入核的影響
        4.2.5 海馬多肽對MAPK信號通路的影響
        4.2.6 熒光顯微鏡檢測細(xì)胞內(nèi)線粒體膜電位的變化情況
        4.2.7 彗星實驗
        4.2.8 酶聯(lián)免疫法檢測細(xì)胞內(nèi)TNF-α含量的變化情況
        4.2.9 數(shù)據(jù)處理
    4.3 結(jié)果與分析
        4.3.1 形態(tài)學(xué)觀察海馬多肽對細(xì)胞凋亡的影響
        4.3.2 海馬多肽對細(xì)胞內(nèi)與凋亡相關(guān)的蛋白的影響
        4.3.3 海馬多肽對Akt和 NF-κB信號通路的影響
        4.3.4 海馬多肽對細(xì)胞內(nèi)p65 蛋白入核的影響
        4.3.5 海馬多肽對MAPK信號通路的影響
        4.3.6 海馬多肽對細(xì)胞內(nèi)線粒體膜電位的影響
        4.3.7 彗星實驗
        4.3.8 海馬多肽對細(xì)胞內(nèi)TNF-α含量的影響
    4.4 討論
5 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
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本文編號：3781517