過(guò)量飲酒會(huì)引起廣泛的肝臟疾病,如脂肪性肝炎、肝纖維化、肝硬化和肝癌。特別是酒精性肝病(alcoholic live disease,ALD),已引起廣泛關(guān)注。本文以來(lái)源于海馬的兩種多肽為實(shí)驗(yàn)原料,考察了兩種海馬多肽的活性,研究了SHP-1(VSIADSKA,Val-Ser-Ile-Ala-Asp-Ser-Lys-Ala)和SHP-2(ENANGP,Glu-Asn-Ala-Asn-Gly-Pro)對(duì)人肝癌細(xì)胞(HepG2)酒精性損傷的保護(hù)作用及其機(jī)制,為海馬多肽在ALD的預(yù)防和治療中提供了理論基礎(chǔ)。主要研究?jī)?nèi)容及結(jié)果如下:1、采用MTT實(shí)驗(yàn)測(cè)定細(xì)胞活力。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,酒精的最佳作用濃度為0.75 M;在10-100μM濃度范圍內(nèi),兩種多肽對(duì)細(xì)胞均無(wú)毒害作用;與酒精損傷組(對(duì)照組)相比,在10-100μM時(shí),細(xì)胞相對(duì)活力明顯增強(qiáng),且呈濃度依賴(lài)性。這說(shuō)明兩種海馬多肽對(duì)酒精誘導(dǎo)的HepG2細(xì)胞損傷均具有保護(hù)作用。2、采用DCFH-DA法檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)ROS的含量。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,與對(duì)照組相比,兩種海馬多肽都減少了細(xì)胞內(nèi)ROS的含量,即海馬多肽可有效抑制ROS的生成。3、采用SOD、GSH和GGT檢測(cè)...

【文章頁(yè)數(shù)】：68 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
1 緒論
    1.1 研究背景
        1.1.1 酒精性肝病
        1.1.2 氧化應(yīng)激
        1.1.3 細(xì)胞凋亡
        1.1.4 抗氧化劑
    1.2 海馬的研究
        1.2.1 海馬的介紹
        1.2.2 海馬的主要化學(xué)成分
        1.2.3 海馬的藥理活性
    1.3 技術(shù)路線
    1.4 研究目的和意義
2 兩種海馬多肽對(duì)酒精誘導(dǎo)的HEPG2 細(xì)胞損傷的保護(hù)作用
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料與儀器
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑
        2.1.3 儀器與設(shè)備
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        2.2.2 酒精濃度篩選
        2.2.3 樣品毒性實(shí)驗(yàn)
        2.2.4 海馬多肽對(duì)酒精誘導(dǎo)HepG2 細(xì)胞損傷的保護(hù)作用
        2.2.5 數(shù)據(jù)處理
    2.3 結(jié)果與分析
        2.3.1 酒精濃度對(duì)HepG2 細(xì)胞活力的影響
        2.3.2 海馬多肽對(duì)細(xì)胞活力的影響
        2.3.3 海馬多肽對(duì)酒精誘導(dǎo)HepG2 細(xì)胞損傷的保護(hù)作用
    2.4 討論
3 兩種海馬多肽對(duì)酒精誘導(dǎo)HEPG2 細(xì)胞產(chǎn)生氧化應(yīng)激損傷的保護(hù)作用
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料與儀器
        3.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑
        3.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器
        3.1.4 主要溶液配制
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 HepG2 細(xì)胞內(nèi)ROS的測(cè)定
        3.2.2 HepG2 細(xì)胞內(nèi)SOD含量的測(cè)定
        3.2.3 HepG2 細(xì)胞內(nèi)GSH含量的測(cè)定
        3.2.4 HepG2 細(xì)胞內(nèi)GGT含量的測(cè)定
        3.2.5 Western blot檢測(cè)HepG2 細(xì)胞內(nèi)SOD、GSH和 GGT蛋白的表達(dá)情況
        3.2.6 數(shù)據(jù)處理
    3.3 結(jié)果與分析
        3.3.1 海馬多肽對(duì)HepG2 細(xì)胞內(nèi)ROS含量的影響
        3.3.2 海馬多肽對(duì)HepG2 細(xì)胞內(nèi)SOD含量的影響
        3.3.3 海馬多肽對(duì)HepG2 細(xì)胞內(nèi)GSH含量的影響
        3.3.4 海馬多肽對(duì)HepG2 細(xì)胞內(nèi)GGT含量的影響
        3.3.5 海馬多肽對(duì)HepG2 細(xì)胞內(nèi)SOD、GSH和 GGT蛋白表達(dá)的影響
    3.4 討論
4 兩種海馬多肽對(duì)HEPG2 細(xì)胞凋亡通路的調(diào)控
    4.1 實(shí)驗(yàn)材料與儀器
        4.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        4.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑
        4.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器
        4.1.4 主要溶液配制
    4.2 實(shí)驗(yàn)方法
        4.2.1 海馬多肽對(duì)細(xì)胞形態(tài)的影響
        4.2.2 Western blot實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)與凋亡相關(guān)的蛋白的表達(dá)情況
        4.2.3 海馬多肽對(duì)Akt和 NF-κB信號(hào)通路的影響
        4.2.4 免疫熒光法檢測(cè)海馬多肽對(duì)HepG2 細(xì)胞內(nèi)p65 蛋白入核的影響
        4.2.5 海馬多肽對(duì)MAPK信號(hào)通路的影響
        4.2.6 熒光顯微鏡檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)線粒體膜電位的變化情況
        4.2.7 彗星實(shí)驗(yàn)
        4.2.8 酶聯(lián)免疫法檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)TNF-α含量的變化情況
        4.2.9 數(shù)據(jù)處理
    4.3 結(jié)果與分析
        4.3.1 形態(tài)學(xué)觀察海馬多肽對(duì)細(xì)胞凋亡的影響
        4.3.2 海馬多肽對(duì)細(xì)胞內(nèi)與凋亡相關(guān)的蛋白的影響
        4.3.3 海馬多肽對(duì)Akt和 NF-κB信號(hào)通路的影響
        4.3.4 海馬多肽對(duì)細(xì)胞內(nèi)p65 蛋白入核的影響
        4.3.5 海馬多肽對(duì)MAPK信號(hào)通路的影響
        4.3.6 海馬多肽對(duì)細(xì)胞內(nèi)線粒體膜電位的影響
        4.3.7 彗星實(shí)驗(yàn)
        4.3.8 海馬多肽對(duì)細(xì)胞內(nèi)TNF-α含量的影響
    4.4 討論
5 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
作者簡(jiǎn)介
導(dǎo)師簡(jiǎn)介



本文編號(hào)：3781517