背景:我國是肝病大國,隨著人們生活水平的提高,酒精在生活中的濫用,酒精性肝病(alcoholic liver disease,ALD)的發(fā)病率也迅速增加。在我國,酒精性肝病在飲酒人群中的發(fā)病率高達6.18%。近年來,越來越多的研究著眼于micro RNA在酒精性肝病中對脂質代謝、凋亡、炎癥等過程的微觀調控作用。micro RNA是一類長度為18-24個核苷酸的非編碼小RNA,雖然不能編碼蛋白質,但是可以通過靶向靶基因m RNA的3’UTR區(qū)的堿基對來調控下游基因的表達。已有大量文獻報道了mi R-200a在肝纖維化,肝癌中具有重要的調控作用,但其在酒精性肝病中的角色尚未被定義。探討mi R-200a在酒精性肝病中的作用及其作用機制,是防治酒精性肝病的重要方法之一。E盒鋅指結合蛋白(ZEB)1和2在上皮細胞向間質細胞轉化分化過程中抑制E-cadherin的表達,誘導上皮間質轉化(EMT),EMT的異常激活是腫瘤發(fā)生發(fā)展的重要因素。ZEB2在細胞凋亡過程中發(fā)揮重要作用,但其在酒精性肝病中的作用尚不明確。有研究發(fā)現(xiàn)micro RNA200家族與ZEB2有著密切聯(lián)系。本課題組擬以酒精飼養(yǎng)小鼠模...

【文章頁數(shù)】：78 頁

【學位級別】：碩士

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中文摘要
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1.前言
2.實驗材料
    2.1 實驗動物
    2.2 實驗細胞
    2.3 實驗試劑
    2.4 主要儀器
    2.5 溶劑和試劑配制
3.試驗方法
    3.1 動物模型建立
    3.2 HE染色
    3.3 組織免疫熒光單染
    3.4 組織TUNEL染色
    3.5 細胞培養(yǎng)和處理
    3.6 MTT試驗
    3.7 細胞凋亡檢測(AnnexinV-FITC/PI雙染法)
    3.8 血清谷丙轉氨酶(ALT)含量測定(微板法)
    3.9 血清谷草轉氨酶(AST)含量測定(微板法)
    3.10 細胞總RNA的提取與濃度檢測
    3.11 cDNA合成
    3.12 RT-qPCR
    3.13 WesternBlot
        3.13.1 蛋白提取
        3.13.2 蛋白定量
        3.13.3 SDS-PAGE電泳
        3.13.4 濕轉
        3.13.5 抗原抗體反應及顯色
    3.14 細胞轉染
        3.14.1 siRNA轉染實驗
        3.14.2 質粒提取與轉染
    3.15 統(tǒng)計學處理
4.實驗結果
    4.1 酒精性肝病小鼠模型的建立
    4.2 miR-200a在小鼠原代肝細胞中表達變化
    4.3 乙醇刺激AML-12細胞濃度探索及miR-200a體外表達變化.
    4.4 miR-200a在小鼠體內對肝細胞凋亡的影響
    4.5 miR-200a對AML-12細胞凋亡的影響
    4.6 miR-200a與ZEB2的靶向關系
    4.7 ZEB2對AML-12細胞凋亡的影響
    4.8 miR-200amimics與ZEB2過表達質粒共轉染對AML-12細胞凋亡的影響
5.討論
6.結論
參考文獻
附錄
致謝
綜述
    參考文獻



本文編號：3780957