炎癥性腸病(IBD)是一種天然免疫性疾病。目前其發(fā)病機(jī)理尚不明確,臨床上尚無有效的治療藥物。Kallistatin(Kal)是一種血管生成抑制劑和肝素結(jié)合蛋白,其在生理和病理反應(yīng)中有多種作用,如抗炎、抗血管生成等,被認(rèn)為是腸炎、關(guān)節(jié)炎、損傷修復(fù)的候選藥物。 本實(shí)驗(yàn)首先通過對兩種質(zhì)粒的酶切鑒定,X-gal染色法和細(xì)胞免疫熒光法驗(yàn)證了pAAV-LacZ質(zhì)粒和pAAV-Kal質(zhì)粒,及對細(xì)胞轉(zhuǎn)染鑒定了Kal可在細(xì)胞內(nèi)表達(dá)。并利用電穿孔法將基因?qū)肜ッ餍∈篌w內(nèi),比較其與非電穿孔法介導(dǎo)的基因表達(dá)差異。同時(shí)檢測電穿孔介導(dǎo)的Kal在不同轉(zhuǎn)染濃度、不同時(shí)間的表達(dá)情況,并繪制不同轉(zhuǎn)染濃度下的表達(dá)曲線。使用電穿孔法介導(dǎo)Kal對三硝基苯磺酸(TNBS)誘導(dǎo)的小鼠IBD模型進(jìn)行基因預(yù)防治療,通過檢測小鼠的體重變化、存活率、以及病理切片分析Kal對其治療效果。并通過組織免疫熒光法初步探討Kal在小鼠結(jié)腸炎中的抗炎機(jī)制。 研究結(jié)果顯示電穿孔介導(dǎo)Kal基因表達(dá)可以劑量依賴性的降低IBD模型的炎癥反應(yīng)。結(jié)腸病理切片分析顯示,Kal可以降低單核細(xì)胞的侵襲,同時(shí)利用免疫熒光發(fā)現(xiàn)Kal多集中于炎癥區(qū),我們推測這可能說明Kal...

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【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 引言
    1.1 Kallistatin 的研究進(jìn)展
        1.1.1 Kallistatin 的特性及結(jié)構(gòu)活性關(guān)系
        1.1.2 Kallistatin 的分布及調(diào)節(jié)
        1.1.3 Kallistatin 的功能
        1.1.4 總結(jié)及展望
    1.2 炎癥性腸病機(jī)制研究進(jìn)展
        1.2.1 腸道微生物的“兩面性”
        1.2.2 保持腸道內(nèi)平衡路徑的研究
        1.2.3 炎性體研究（Inflammsome）
        1.2.4 NOD2 的研究
        1.2.5 天然免疫、結(jié)腸炎和組織修復(fù)
    1.3 活體電穿孔的研究進(jìn)展
        1.3.1 活體電穿孔的的原理和特點(diǎn)
        1.3.2 影響活體電穿孔效率的因素
        1.3.3 活體電穿孔在不同組織上的應(yīng)用
        1.3.4 活體電穿孔與核酸免疫
        1.3.5 活體電穿孔與基因治療
        1.3.6 展望
第二章 pAAV-Kal 及pAAV-LacZ質(zhì)粒的細(xì)胞內(nèi)表達(dá)
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料、試劑與儀器
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑
        2.1.3 主要實(shí)驗(yàn)儀器
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 主要試劑配制
        2.2.2 pAAV-Kal 及pAAV-LacZ 質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化及鑒定
        2.2.3 質(zhì)粒的大量提取、純化及濃度測定
        2.2.4 細(xì)胞培養(yǎng)
        2.2.5 質(zhì)粒表達(dá)鑒定
    2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析
        2.3.1 pAAV-LacZ 及pAAV-Kal 酶切鑒定
        2.3.2 pAAV-LacZ 及pAAV-Kal 在細(xì)胞內(nèi)表達(dá)
        2.3.3 小結(jié)
第三章 電穿孔介導(dǎo)pAAV-Kal 及pAAV-LacZ質(zhì)粒在小鼠體內(nèi)的表達(dá)
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料、試劑與儀器
        3.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑
        3.1.3 主要實(shí)驗(yàn)儀器
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 主要試劑配制
        3.2.2 活體電穿孔法介導(dǎo)LacZ 質(zhì)粒在小鼠體內(nèi)的表達(dá)
        3.2.3 活體電穿孔法轉(zhuǎn)導(dǎo)pAAV-Kal 質(zhì)粒在小鼠體內(nèi)的表達(dá)
        3.2.4 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)分析
    3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果及分析
        3.3.1 活體電穿孔法介導(dǎo)LacZ 質(zhì)粒在小鼠體內(nèi)的表達(dá)
        3.3.2 活體電穿孔法介導(dǎo)pAAV-Kal 質(zhì)粒在小鼠體內(nèi)的表達(dá)
    3.4 討論
第四章 Kal 對小鼠結(jié)腸炎的預(yù)防治療作用
    4.1 實(shí)驗(yàn)材料、試劑與儀器
        4.1.1 實(shí)驗(yàn)材料及儀器
        4.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑
    4.2 實(shí)驗(yàn)方法
        4.2.1 主要試劑配制
        4.2.2 動物模型建立及給藥
        4.2.3 Kal 對腸炎小鼠預(yù)防作用
        4.2.4 數(shù)據(jù)分析
    4.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析
        4.3.1 小鼠體重變化及死亡率
        4.3.2 模型小鼠結(jié)腸長度變化
        4.3.3 小鼠結(jié)腸組織病理切片及免疫熒光分析
    4.4 討論
結(jié)論
論文創(chuàng)新點(diǎn)
發(fā)表論文及參加會議情況
參考文獻(xiàn)
致謝



本文編號：3777773