幽門(mén)螺桿菌(Helicobacter pylori，H．pylori)是在1983年發(fā)現(xiàn)的一種螺桿狀的革蘭氏陰性微需氧菌。它可在人胃粘膜上皮細(xì)胞定植數(shù)十年，引起多種消化系統(tǒng)疾病，如：慢性胃炎，消化性潰瘍等。最近的流行病學(xué)研究表明：幽門(mén)螺桿菌感染與胃癌、胃粘膜相關(guān)性淋巴組織淋巴瘤(MALT)的發(fā)生密切相關(guān)。WHO已將該菌列為Ⅰ類(lèi)致癌因子。但目前關(guān)于H．pylori感染導(dǎo)致胃癌發(fā)生的分子機(jī)制還不清楚。 CagA蛋白是由H．pylori分泌的一種重要的毒力因子，它是由cagA基因編碼的一個(gè)120-145kDa的蛋白質(zhì)。目前認(rèn)為cagA陽(yáng)性菌株比cagA陰性菌株有更大的毒性，并增加了胃癌的發(fā)病率。當(dāng)cagA陽(yáng)性菌株感染人胃粘膜上皮細(xì)胞后，就會(huì)將CagA蛋白通過(guò)Ⅳ型分泌系統(tǒng)注射到胃粘膜上皮細(xì)胞內(nèi)，進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)的CagA蛋白定位在質(zhì)膜內(nèi)表面，一方面可以在Src家族蛋白酪氨酸激酶的作用下，其C末端的EPIYA模序中的酪氨酸殘基發(fā)生磷酸化修飾，磷酸化的CagA蛋白可與SHP-2中的SH2結(jié)構(gòu)域結(jié)合，并激活SHP-2的磷酸酶活性，激活的SHP-2可以參與MAPK／MEK／ERK途徑，這一途徑的異常...

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【學(xué)位級(jí)別】：博士

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符號(hào)說(shuō)明
文獻(xiàn)綜述
    一.幽門(mén)螺桿菌及其毒力因子CagA的研究進(jìn)展
    二.腫瘤抑制基因Runx3的主要研究進(jìn)展
    三.幽門(mén)螺桿菌及其球形體的研究進(jìn)展
第一部分 幽門(mén)螺桿菌CagA對(duì)Runx3基因表達(dá)的調(diào)控
    1.實(shí)驗(yàn)材料
        1.1 主要試劑和藥品
        1.2 主要儀器
    2.實(shí)驗(yàn)方法
        2.1 GES-1細(xì)胞的培養(yǎng)
        2.2 細(xì)胞轉(zhuǎn)染
        2.3 質(zhì)粒DNA的轉(zhuǎn)化,提取及酶切鑒定
        2.4 RNA的提取
        2.5 RT-PCR檢測(cè)
        2.6 Western blot檢測(cè)
    3.實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.1 WT-CagA/pcDNA3.1與PR-CagA/pcDNA3.1質(zhì)粒的酶切鑒定
        3.2 WT-CagA/pcDNA3.1及PR-CagA/peDNA3.1轉(zhuǎn)染GES-1細(xì)胞后CagA蛋白的表達(dá)
        3.3 RT-PCR分析幽門(mén)螺桿菌WT-CagA對(duì)Runx3基因轉(zhuǎn)錄的調(diào)控
        3.4 WT-CagA在蛋白水平對(duì)Runx3基因表達(dá)的調(diào)控
        3.5 RT-PCR分析PR-CagA對(duì)Runx3基因轉(zhuǎn)錄的調(diào)控
        3.6 PR-CagA在蛋白水平對(duì)Runx3基因表達(dá)調(diào)控
        3.7 RT-PCR分析WT-CagA對(duì)CyclinD1及Bim基因轉(zhuǎn)錄的調(diào)控
        3.8 WT-CagA在蛋白水平對(duì)CyclinD1基因表達(dá)的調(diào)控
    4.討論
第二部分 幽門(mén)螺桿菌CagA調(diào)節(jié)Runx3表達(dá)的分子機(jī)制研究
    1.實(shí)驗(yàn)材料
        1.1 主要試劑和藥品
        1.2 主要儀器
    2.實(shí)驗(yàn)方法
        2.1 GES-1細(xì)胞的培養(yǎng)
        2.2 甲基化特異PCR檢測(cè)
        2.3 Runx3啟動(dòng)子熒光素酶報(bào)告質(zhì)粒載體的構(gòu)建
        2.4 熒光素酶報(bào)道基因重組質(zhì)粒的轉(zhuǎn)染
        2.5 雙熒光素酶活性檢測(cè)
    3.實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.1 甲基化特異PCR結(jié)果
        3.2 PCR擴(kuò)增Runx3基因5’上游1150bp啟動(dòng)子片段及其T克隆鑒定
        3.3 pGL₃-1150bp啟動(dòng)子質(zhì)粒的鑒定及測(cè)序
        3.4 pGL₃-1150bp啟動(dòng)子轉(zhuǎn)染GES-1細(xì)胞及雙熒光素酶活性測(cè)定
    4.討論
    第一、二部分總結(jié)
第三部分 幽門(mén)螺桿菌及其球形體感染胃粘膜上皮細(xì)胞后的基因表達(dá)譜的研究
    1.實(shí)驗(yàn)材料
        1.1 主要試劑和藥品
        1.2 主要儀器
    2.實(shí)驗(yàn)方法
        2.1 GES-1細(xì)胞的培養(yǎng)
        2.2 幽門(mén)螺桿菌的培養(yǎng)及球形體的誘導(dǎo)
        2.3 GES-1細(xì)胞與幽門(mén)螺桿菌的共培養(yǎng)
        2.4 掃描電鏡觀察幽門(mén)螺桿菌及其球形體與GES-1細(xì)胞的粘附
        2.5 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡
        2.6 RNA的提取
        2.7 cDNA微陣列分析
        2.8 RT-PCR檢測(cè)
    3.實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.1 掃描電鏡觀察到的幽門(mén)螺桿菌與GES-1細(xì)胞的粘附情況
        3.2 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡結(jié)果
        3.3 所提取RNA的質(zhì)量控制
        3.4 cDNA微陣列結(jié)果
        3.5 RT-PCR結(jié)果
    4.討論
    第三部分總結(jié)
參考文獻(xiàn)
致謝
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本文編號(hào)：3764674