目的 肝纖維化是各種肝損傷的共同結果，肝星狀細胞(HSC)是肝纖維化形成的細胞基礎，許多細胞因子參與了肝纖維化和肝硬化的形成，，分子機理表明，在許多細胞因子參與中，轉化生長因子β1(TGF-β1)在HSC的激活、細胞外基質(zhì)的聚積起著非常關鍵的作用，RNA干擾(RNAi)是一種能達到特異性抑制目的基因表達的現(xiàn)象，已成功地下調(diào)了一些內(nèi)源性基因的表達。我們目的是通過構建表達TGF-β1小干擾RNA(siRNAs)的psu6TGF質(zhì)粒，觀察其在肝星狀細胞中對HSC的信號激活和膠原的影響。 方法 (1)從NCBI網(wǎng)站獲得大鼠TGF-B1的cDNA序列，根據(jù)Ambion公司網(wǎng)上設計軟件設計三個siRNA作用靶點，相應的雙鏈DNA被插入pSilencer2.1-U6質(zhì)粒中，即，siTGFA、siTGFB、 siTGFC；(2)以脂質(zhì)體Metafectene2000轉染含熒光素基因(GFP)的質(zhì)粒于HSC-T6細胞中，觀察轉染效率：(3)為了得到高效沉默TGF-β1siRNA，利用脂質(zhì)體Metafectene2000將各組siRNA 1ug，2ug，4ug，6ug，8ug轉染HSC-T6細胞...

【文章頁數(shù)】：77 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
一、中文摘要
二、英文摘要
三、英漢縮略語名詞對照表
四、論文正文
    前言
    第一章 抗轉化生長因子-β₁小干擾RNA表達質(zhì)粒的建立
        1.1 材料與方法
        1.2 結果
        1.3 討論
    第二章 高效沉默轉化生長因子-β₁小干擾RNA表達質(zhì)粒的篩選
        2.1 材料與方法
        2.2 結果
        2.3 討論
    第三章 TGF-β₁小干擾RNA表達質(zhì)粒對肝星狀細胞活化和細胞外基質(zhì)的影響
        3.1 材料與方法
        3.2 結果
        3.3 討論
    結論
    參考文獻
五、綜述
    綜述一：TGF-β₁與肝纖維化
    綜述二：RNAi的研究進展
六、攻讀學位期間發(fā)表的文章
七、致謝



本文編號：3753224