目的 肝纖維化是各種肝損傷的共同結(jié)果，肝星狀細(xì)胞(HSC)是肝纖維化形成的細(xì)胞基礎(chǔ)，許多細(xì)胞因子參與了肝纖維化和肝硬化的形成，，分子機(jī)理表明，在許多細(xì)胞因子參與中，轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1(TGF-β1)在HSC的激活、細(xì)胞外基質(zhì)的聚積起著非常關(guān)鍵的作用，RNA干擾(RNAi)是一種能達(dá)到特異性抑制目的基因表達(dá)的現(xiàn)象，已成功地下調(diào)了一些內(nèi)源性基因的表達(dá)。我們目的是通過(guò)構(gòu)建表達(dá)TGF-β1小干擾RNA(siRNAs)的psu6TGF質(zhì)粒，觀察其在肝星狀細(xì)胞中對(duì)HSC的信號(hào)激活和膠原的影響。 方法 (1)從NCBI網(wǎng)站獲得大鼠TGF-B1的cDNA序列，根據(jù)Ambion公司網(wǎng)上設(shè)計(jì)軟件設(shè)計(jì)三個(gè)siRNA作用靶點(diǎn)，相應(yīng)的雙鏈DNA被插入pSilencer2.1-U6質(zhì)粒中，即，siTGFA、siTGFB、 siTGFC；(2)以脂質(zhì)體Metafectene2000轉(zhuǎn)染含熒光素基因(GFP)的質(zhì)粒于HSC-T6細(xì)胞中，觀察轉(zhuǎn)染效率：(3)為了得到高效沉默TGF-β1siRNA，利用脂質(zhì)體Metafectene2000將各組siRNA 1ug，2ug，4ug，6ug，8ug轉(zhuǎn)染HSC-T6細(xì)胞...

【文章頁(yè)數(shù)】：77 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
一、中文摘要
二、英文摘要
三、英漢縮略語(yǔ)名詞對(duì)照表
四、論文正文
    前言
    第一章 抗轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β₁小干擾RNA表達(dá)質(zhì)粒的建立
        1.1 材料與方法
        1.2 結(jié)果
        1.3 討論
    第二章 高效沉默轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β₁小干擾RNA表達(dá)質(zhì)粒的篩選
        2.1 材料與方法
        2.2 結(jié)果
        2.3 討論
    第三章 TGF-β₁小干擾RNA表達(dá)質(zhì)粒對(duì)肝星狀細(xì)胞活化和細(xì)胞外基質(zhì)的影響
        3.1 材料與方法
        3.2 結(jié)果
        3.3 討論
    結(jié)論
    參考文獻(xiàn)
五、綜述
    綜述一：TGF-β₁與肝纖維化
    綜述二：RNAi的研究進(jìn)展
六、攻讀學(xué)位期間發(fā)表的文章
七、致謝



本文編號(hào)：3753224