目的:探討CYP2E1在脂肪酸酒精協(xié)同刺激下對(duì)炎性因子表達(dá)及信號(hào)通路的影響及意義.方法:1、慢病毒轉(zhuǎn)染構(gòu)建CYP2E1穩(wěn)定高表達(dá)的巨噬細(xì)胞系(Raw264.7細(xì)胞),此細(xì)胞系記為RE1組,用未轉(zhuǎn)染的普通巨噬細(xì)胞系作為參照,記為Raw組。2、使用脂肪酸及乙醇刺激細(xì)胞,建立酒精脂肪酸協(xié)同增效的炎性模型;同時(shí)在這兩個(gè)細(xì)胞系中分別設(shè)立四個(gè)組:(1)空白對(duì)照組(C組)(2)酒精組(50mM,A組)(3)脂肪酸組(0.5mM,F組)(4)酒精+脂肪酸組(濃度同前,AF組)。3、使用油紅O染色檢測(cè)細(xì)胞經(jīng)酒精及脂肪酸刺激后的脂肪變情況;4、使用Real-time PCR檢測(cè)細(xì)胞中TNF-α的表達(dá);5、使用western blot檢測(cè)細(xì)胞中NF-κB、MAPK、STAT3的磷酸化蛋白來明確炎性相關(guān)的信號(hào)通路的表達(dá);6、將模型中各組的上清與正常肝細(xì)胞進(jìn)行共培養(yǎng)4小時(shí)后,檢測(cè)上清中的轉(zhuǎn)氨酶變化,用油紅O染色鑒定肝細(xì)胞中的中性脂滴累積情況。結(jié)果:利用慢病毒技術(shù)建立穩(wěn)定高表達(dá)CYP2E1的raw細(xì)胞系。經(jīng)Real-time PCR和western blot證實(shí)過表達(dá)組較對(duì)照組CYP2E1mrna水平升高46倍(...

【文章頁(yè)數(shù)】：56 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
致謝
摘要
Abstract
前言
材料與方法
結(jié)果
討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
綜述：非酒精性脂肪性肝病相關(guān)信號(hào)通路的研究進(jìn)展
    參考文獻(xiàn)
個(gè)人簡(jiǎn)歷



本文編號(hào)：3738295