目的:肝纖維化是肝硬化和肝癌前期必經(jīng)的病理過程,其特征為肝星狀細(xì)胞（hepatic stellate call,HSC）活化導(dǎo)致細(xì)胞外基質(zhì)（extracellular matrix,ECM）過度沉積。前期研究發(fā)現(xiàn)人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞（human umbilical cord mesenchymal stem cell,hucMSC）來源的外泌體（hucMSC derived exosome,hucMSC-ex）可修復(fù)小鼠肝纖維化,但具體的機制尚不明確。microRNA（mi RNA）是非編碼單鏈小RNA,參與基因的轉(zhuǎn)錄后調(diào)控,在肝纖維化進程中發(fā)揮關(guān)鍵作用。本研究旨在探討hucMSC-ex轉(zhuǎn)運miR-373和Let-7b修復(fù)肝纖維化的作用及機制,為肝纖維化的治療提供新的手段。方法:1)采用miRNeasy serum/plasma kit提取健康人和肝纖維化患者血清exosome以及健康小鼠和肝纖維小鼠肝組織及血清exosome中的mi RNA,采用定量PCR檢測兩組血清exosome和組織中miR-373的表達(dá)。2)過表達(dá)或敲減肝星狀細(xì)胞（LX-2）中miR-373,通過定量PCR、We... 

【文章頁數(shù)】：79 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略詞中英文注釋表
第一章 緒論
    1.1 間充質(zhì)干細(xì)胞
        1.1.1 間充質(zhì)干細(xì)胞生物學(xué)特性
        1.1.2 MSC與組織修復(fù)
        1.1.3 MSC來源外泌體的生物學(xué)特征
    1.2 MSC與肝纖維化
        1.2.1 肝纖維化的發(fā)病機制
        1.2.2 MSC與肝纖維化
        1.2.3 MSC-ex與肝纖維化
    1.3 miRNA在肝纖維化治療中的作用
        1.3.1 miRNA的生物學(xué)特性
        1.3.2 miRNA與肝臟疾病
        1.3.3 miR-373與Let-7b
    1.4 研究目的、方法、技術(shù)路線和意義
        1.4.1 研究目的
        1.4.2 研究方法
        1.4.3 技術(shù)路線
        1.4.4 研究意義
第二章 HucMSC-ex轉(zhuǎn)運miR-373緩解肝纖維化
    2.1 材料
        2.1.1 實驗動物
        2.1.2 細(xì)胞株
        2.1.3 主要試劑
        2.1.4 主要的儀器及相關(guān)耗材
    2.2 實驗方法
        2.2.1 小鼠肝纖維化模型建立
        2.2.2 HucMSC-ex的分離與鑒定
        2.2.3 細(xì)胞轉(zhuǎn)染miR-373mimics/inhibitor
        2.2.4 HucMSC-ex處理活化的LX-2細(xì)胞
        2.2.5 細(xì)胞和組織蛋白提取
        2.2.6 Westernblot
        2.2.7 RNA提取
        2.2.8 RNA逆轉(zhuǎn)錄
        2.2.9 熒光定量PCR
        2.2.10 細(xì)胞免疫熒光
        2.2.11 HucMSC-ex移植治療小鼠肝纖維化
        2.2.12 HE、Masson和SiriusRed染色
        2.2.13 免疫組織化學(xué)法
        2.2.14 激光共聚焦顯微鏡觀察exosome細(xì)胞內(nèi)定位
        2.2.15 標(biāo)記的HucMSC-ex進行動物活體成像
        2.2.16 血清exosome及其miRNAs的提取
        2.2.17 雙熒光素酶報告基因
        2.2.18 可溶性膠原的檢測
        2.2.19 常溫孵育法與超聲法
        2.2.20 統(tǒng)計分析
    2.3 結(jié)果
        2.3.1 miR-373與肝纖維化密切相關(guān)
        2.3.2 miR-373抑制LX-2細(xì)胞的膠原合成
        2.3.3 miR-373調(diào)控肝星狀細(xì)胞的TGF-βR2表達(dá)
        2.3.4 HucMSC-ex改善肝纖維化
        2.3.5 HucMSC-ex-miR-373調(diào)控TGF-βR2表達(dá)和膠原合成
        2.3.6 miR-373修飾的hucMSC-ex促進肝纖維化修復(fù)
    2.4 討論
第三章 HucMSC-ex轉(zhuǎn)運Let-7b緩解肝纖維化
    3.1 材料
        3.1.1 實驗動物
        3.1.2 細(xì)胞株
        3.1.3 主要試劑
        3.1.4 主要的儀器及相關(guān)耗材
    3.2
        3.2.1 小鼠肝纖維化模型建立、HucMSC-ex移植治療
        3.2.2 RNA的提取、逆轉(zhuǎn)錄、熒光定量PCR
        3.2.3 細(xì)胞蛋白提取、Westernblot
        3.2.4 免疫組織化學(xué)法
        3.2.5 細(xì)胞免疫熒光
    3.3 結(jié)果
        3.3.1 HucMSC-ex調(diào)控TGF-βR
        3.3.2 HucMSC-ex通過Let-7b調(diào)控TGF-βR1,抑制肝纖維化
    3.4 討論
第四章 總結(jié)與展望
    4.1 結(jié)論
    4.2 展望
參考文獻
致謝
攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文及參加會議
    一、發(fā)表論文
    二、參加會議
    三、獲獎情況



本文編號：3735893