肝臟炎癥是增加各類藥物產(chǎn)生肝毒性的重要因素之一,但是在藥物上市之前,臨床上通常不對(duì)其進(jìn)行評(píng)估,因此建立一種合適可靠的人類體外肝樣模型對(duì)合理評(píng)價(jià)藥物毒性十分關(guān)鍵。本研究利用了球形板體外3D培養(yǎng)技術(shù),選用了三種人源化細(xì)胞分別為HepaRG細(xì)胞、肝星形細(xì)胞（HSC）以及肝庫(kù)普弗（KC）細(xì)胞進(jìn)行體外細(xì)胞共培養(yǎng),保持HepaRG細(xì)胞和HSC數(shù)量相同,同時(shí)調(diào)節(jié)不同的KC細(xì)胞數(shù)量以建立三種體外3D共培養(yǎng)模型,分別命名為0%KCs、10%KCs（模擬人正常肝臟）和40%KCs（模擬人肝臟發(fā)炎）,模型建成后對(duì)其進(jìn)行17天的肝臟特異性功能的評(píng)價(jià)和細(xì)胞形態(tài)觀察。結(jié)果顯示,利用球形超低吸附培養(yǎng)板培養(yǎng)出來(lái)的3D肝臟小球,球體居中,形成球體的時(shí)間快,無(wú)需轉(zhuǎn)移至新的培養(yǎng)板中且易于進(jìn)行藥物處理。建立的三種體外3D共培養(yǎng)模型均隨著時(shí)間的推移而逐漸增大,直徑最大可達(dá)到500-600μm,均能在17天內(nèi)保持高水平白蛋白、總膽汁酸的分泌以及尿素的合成,表明我們?cè)隗w外所建立的3D小球可以長(zhǎng)時(shí)間保留肝臟的特異性功能。隨后我們?cè)u(píng)估了3D小球中KC細(xì)胞的功能。脂多糖（LPS）是一種細(xì)菌內(nèi)毒素,它可刺激機(jī)體產(chǎn)生白介素和腫瘤壞死因子等,... 

【文章頁(yè)數(shù)】：79 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
第1章 緒論
    1.1 藥物性肝損傷
        1.1.1 體內(nèi)模型
        1.1.2 體外模型
    1.2 體外3D細(xì)胞培養(yǎng)
        1.2.1 3D細(xì)胞培養(yǎng)的發(fā)展歷史
        1.2.2 3D細(xì)胞培養(yǎng)方式
        1.2.3 3D細(xì)胞培養(yǎng)的應(yīng)用
    1.3 肝臟中的主要細(xì)胞類型
        1.3.1 肝細(xì)胞
        1.3.2 肝星形細(xì)胞
        1.3.3 庫(kù)普弗細(xì)胞
        1.3.4 肝炎癥模型的研究現(xiàn)狀
    1.4 肝臟中的炎癥
        1.4.1 藥物性肝損傷與炎癥反應(yīng)
    1.5 研究的目的及意義
        1.5.1 研究的目的
        1.5.2 研究的意義
第2章 三維(3D)肝臟模型的建立
    2.1 材料與方法
        2.1.1 材料
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        2.2.2 三種3D共培養(yǎng)模型的建立
    2.3 結(jié)果與討論
        2.3.1 HepaRG細(xì)胞
        2.3.2 HSC細(xì)胞
        2.3.3 三種3D細(xì)胞模型的建立
    2.4 本章小結(jié)
第3章 三種肝臟3D模型的評(píng)價(jià)
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料與儀器
        3.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器
    3.2 實(shí)驗(yàn)過(guò)程
        3.2.1 白蛋白(Albumin)檢測(cè)
        3.2.2 總膽汁酸(TBA)檢測(cè)
        3.2.3 尿素(Urea)檢測(cè)
        3.2.4 總蛋白(BCA)濃度檢測(cè)
        3.2.5 RT-PCR基因表達(dá)分析
        3.2.6炎癥反應(yīng)與藥物毒性實(shí)驗(yàn)
        3.2.7 炎癥標(biāo)志物的檢測(cè)
        3.2.8 氫化可的松對(duì)LPS介導(dǎo)的反應(yīng)的影響
    3.3 結(jié)果與討論
        3.3.1 白蛋白檢測(cè)
        3.3.2 總膽汁酸檢測(cè)
        3.3.3 尿素檢測(cè)
        3.3.4 BCA檢測(cè)
        3.3.5 RT-PCR檢測(cè)
        3.3.6 炎癥標(biāo)志物檢測(cè)
第4章 三維(3D)肝臟模型的應(yīng)用
    4.1 細(xì)胞因子的產(chǎn)生和細(xì)胞毒性
        4.1.1 對(duì)乙酰氨基酚作用于兩種模型下的毒性特點(diǎn)
        4.1.2 異煙肼作用于兩種模型下的毒性特點(diǎn)
        4.1.3 鹽酸胺碘酮作用于兩種模型下的毒性特點(diǎn)
        4.1.4 苯妥英鈉作用于兩種模型下的毒性特點(diǎn)
    4.2 氫化可的松在LPS介導(dǎo)的炎癥模型下的抗炎作用
        4.2.1 兩種模型中氫化可的松對(duì)藥物對(duì)乙酰氨基酚的抗炎作用
        4.2.2 兩種模型中氫化可的松對(duì)藥物異煙肼的抗炎作用
        4.2.3 兩種模型中氫化可的松對(duì)藥物鹽酸胺碘酮的抗炎作用
        4.2.4 兩種模型中氫化可的松對(duì)藥物苯妥英鈉的抗炎作用
    4.3 本章小結(jié)
全文總結(jié)
參考文獻(xiàn)
作者簡(jiǎn)介
致謝



本文編號(hào)：3722237