肝臟炎癥是增加各類藥物產(chǎn)生肝毒性的重要因素之一,但是在藥物上市之前,臨床上通常不對其進行評估,因此建立一種合適可靠的人類體外肝樣模型對合理評價藥物毒性十分關鍵。本研究利用了球形板體外3D培養(yǎng)技術,選用了三種人源化細胞分別為HepaRG細胞、肝星形細胞（HSC）以及肝庫普弗（KC）細胞進行體外細胞共培養(yǎng),保持HepaRG細胞和HSC數(shù)量相同,同時調(diào)節(jié)不同的KC細胞數(shù)量以建立三種體外3D共培養(yǎng)模型,分別命名為0%KCs、10%KCs（模擬人正常肝臟）和40%KCs（模擬人肝臟發(fā)炎）,模型建成后對其進行17天的肝臟特異性功能的評價和細胞形態(tài)觀察。結果顯示,利用球形超低吸附培養(yǎng)板培養(yǎng)出來的3D肝臟小球,球體居中,形成球體的時間快,無需轉(zhuǎn)移至新的培養(yǎng)板中且易于進行藥物處理。建立的三種體外3D共培養(yǎng)模型均隨著時間的推移而逐漸增大,直徑最大可達到500-600μm,均能在17天內(nèi)保持高水平白蛋白、總膽汁酸的分泌以及尿素的合成,表明我們在體外所建立的3D小球可以長時間保留肝臟的特異性功能。隨后我們評估了3D小球中KC細胞的功能。脂多糖（LPS）是一種細菌內(nèi)毒素,它可刺激機體產(chǎn)生白介素和腫瘤壞死因子等,... 

【文章頁數(shù)】：79 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
第1章 緒論
    1.1 藥物性肝損傷
        1.1.1 體內(nèi)模型
        1.1.2 體外模型
    1.2 體外3D細胞培養(yǎng)
        1.2.1 3D細胞培養(yǎng)的發(fā)展歷史
        1.2.2 3D細胞培養(yǎng)方式
        1.2.3 3D細胞培養(yǎng)的應用
    1.3 肝臟中的主要細胞類型
        1.3.1 肝細胞
        1.3.2 肝星形細胞
        1.3.3 庫普弗細胞
        1.3.4 肝炎癥模型的研究現(xiàn)狀
    1.4 肝臟中的炎癥
        1.4.1 藥物性肝損傷與炎癥反應
    1.5 研究的目的及意義
        1.5.1 研究的目的
        1.5.2 研究的意義
第2章 三維(3D)肝臟模型的建立
    2.1 材料與方法
        2.1.1 材料
    2.2 實驗方法
        2.2.1 細胞培養(yǎng)
        2.2.2 三種3D共培養(yǎng)模型的建立
    2.3 結果與討論
        2.3.1 HepaRG細胞
        2.3.2 HSC細胞
        2.3.3 三種3D細胞模型的建立
    2.4 本章小結
第3章 三種肝臟3D模型的評價
    3.1 實驗材料與儀器
        3.1.1 實驗材料
        3.1.2 實驗儀器
    3.2 實驗過程
        3.2.1 白蛋白(Albumin)檢測
        3.2.2 總膽汁酸(TBA)檢測
        3.2.3 尿素(Urea)檢測
        3.2.4 總蛋白(BCA)濃度檢測
        3.2.5 RT-PCR基因表達分析
        3.2.6炎癥反應與藥物毒性實驗
        3.2.7 炎癥標志物的檢測
        3.2.8 氫化可的松對LPS介導的反應的影響
    3.3 結果與討論
        3.3.1 白蛋白檢測
        3.3.2 總膽汁酸檢測
        3.3.3 尿素檢測
        3.3.4 BCA檢測
        3.3.5 RT-PCR檢測
        3.3.6 炎癥標志物檢測
第4章 三維(3D)肝臟模型的應用
    4.1 細胞因子的產(chǎn)生和細胞毒性
        4.1.1 對乙酰氨基酚作用于兩種模型下的毒性特點
        4.1.2 異煙肼作用于兩種模型下的毒性特點
        4.1.3 鹽酸胺碘酮作用于兩種模型下的毒性特點
        4.1.4 苯妥英鈉作用于兩種模型下的毒性特點
    4.2 氫化可的松在LPS介導的炎癥模型下的抗炎作用
        4.2.1 兩種模型中氫化可的松對藥物對乙酰氨基酚的抗炎作用
        4.2.2 兩種模型中氫化可的松對藥物異煙肼的抗炎作用
        4.2.3 兩種模型中氫化可的松對藥物鹽酸胺碘酮的抗炎作用
        4.2.4 兩種模型中氫化可的松對藥物苯妥英鈉的抗炎作用
    4.3 本章小結
全文總結
參考文獻
作者簡介
致謝



本文編號：3722237