肝纖維化是由各種致病因子所致肝內(nèi)結(jié)締組織異常增生,長期發(fā)展會形成肝硬化甚至肝癌,目前仍缺乏有效治療方法。肝星狀細(xì)胞（HSC）在病理?xiàng)l件下被激活為活化HSC（aHSC）,是肝纖維化過程中產(chǎn)生細(xì)胞外基質(zhì)（ECM）的主要細(xì)胞,去除致病因子后肝纖維化過程可逆,其轉(zhuǎn)分化為失活細(xì)胞或發(fā)生細(xì)胞衰老/凋亡從而被體內(nèi)免疫細(xì)胞清除。卵泡抑素樣蛋白1（Fstl1）具有多種生物學(xué)功能,我們前期研究發(fā)現(xiàn)其在肝纖維化中有重要作用,主要表達(dá)在HSC中并影響其轉(zhuǎn)分化,本論文進(jìn)一步研究Fstl1在肝纖維化消退過程的作用及對HSC衰老的影響,主要研究內(nèi)容及結(jié)論如下:（1）我們采用每周兩次、連續(xù)四周注射四氯化碳建立小鼠肝纖維化模型,停止造模恢復(fù)30天后,aHSC分子標(biāo)記α-平滑肌肌動蛋白（α-SMA）和ECM主要蛋白Ⅰ型膠原（Col1）表達(dá)明顯下調(diào),接近正常組水平,同時發(fā)現(xiàn)Fstl1在此過程表達(dá)下調(diào)。半倍缺乏Fstl1小鼠(Fstl1^+/-)與野生型小鼠((Fstl1^+/-)小鼠相比,其肝纖維化程度較輕,且恢復(fù)更快。而在尾靜脈注射過表達(dá)FSTL1腺病毒的小鼠肝臟中,衰老相關(guān)基因如... 

【文章頁數(shù)】：65 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略詞表
第一章 緒論
    1.1 肝纖維化
        1.1.1 肝纖維化的基本介紹
        1.1.2 肝纖維化的發(fā)生機(jī)制
    1.2 肝纖維化的逆轉(zhuǎn)
        1.2.1 肝纖維化的消退
        1.2.2 活化的肝星狀細(xì)胞衰老
        1.2.3 活化的肝星狀細(xì)胞凋亡
        1.2.4 活化的肝星狀細(xì)胞轉(zhuǎn)分化
    1.3 Fstl1簡介及功能
        1.3.1 Fstl1的基因及蛋白結(jié)構(gòu)
        1.3.2 Fstl1對細(xì)胞生長的影響
        1.3.3 Fstl1對細(xì)胞衰老凋亡的影響
        1.3.4 Fstl1對臟器纖維化的影響
    1.4 立題依據(jù)及研究內(nèi)容
        1.4.1 立題依據(jù)
        1.4.2 研究內(nèi)容
第二章 材料與方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞株
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)動物
        2.1.3 主要試劑
        2.1.4 主要儀器
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 動物建模
        2.2.2 細(xì)胞的培養(yǎng)
        2.2.3 原代肝星狀細(xì)胞的分離鑒定及培養(yǎng)
        2.2.4 細(xì)胞衰老模型構(gòu)建
        2.2.5 Fstl1 siRNA敲低細(xì)胞實(shí)驗(yàn)
        2.2.6 Fstl1過表達(dá)細(xì)胞實(shí)驗(yàn)
        2.2.7 小室遷移實(shí)驗(yàn)
        2.2.8 RNA提取(Trizol法)
        2.2.9 逆轉(zhuǎn)錄-cDNA的制備
        2.2.10 實(shí)時熒光定量PCR(qRT-PCR)
        2.2.11 β-gal染色
        2.2.12 Fstl1-creER;Rosa26-tdtomato小鼠基因型鑒定
        2.2.13 病理樣品制備
        2.2.14 免疫組化
        2.2.15 單細(xì)胞測序
        2.2.16 統(tǒng)計學(xué)方法
第三章 結(jié)果與討論
    3.1 Fstl1基因?qū)τ贑Cl4誘導(dǎo)小鼠肝纖維化進(jìn)展及消退的影響
        3.1.1 Fstl1半倍缺失影響小鼠肝臟中纖維化相關(guān)基因的表達(dá)
        3.1.2 Fstl1半倍缺失影響小鼠肝臟中衰老凋亡相關(guān)基因的表達(dá)
        3.1.3 體內(nèi)肝臟過表達(dá)Fstl1對于衰老凋亡相關(guān)基因的影響
        3.1.4 凋亡衰老相關(guān)蛋白在Fstl1~(+/-)小鼠肝臟組織中的表達(dá)情況
        3.1.5 原代分離Fstl1譜系追蹤小鼠肝星狀細(xì)胞
    3.2 Fstl1對于肝星狀細(xì)胞體外分化的影響
        3.2.1 依托泊甙誘導(dǎo)人肝星狀細(xì)胞LX-2衰老模型的建立
        3.2.2 敲低Fstl1對于肝星狀細(xì)胞體外分化的影響
        3.2.3 過表達(dá)Fstl1對肝星狀細(xì)胞體外分化的影響
        3.2.4 小鼠原代肝星狀細(xì)胞的分離
        3.2.5 小鼠原代肝星狀細(xì)胞體外活化過程中纖維化相關(guān)基因的表達(dá)變化
        3.2.6 敲低Fstl1對小鼠原代肝星狀細(xì)胞體外分化的影響
        3.2.7 Fstl1對小鼠原代肝星狀細(xì)胞遷移的影響
    3.3 敲低Fstl1對于小鼠原代HSC單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄水平的影響
        3.3.1 基于Cell Ranger算法的敲低Fstl1后的分組及表達(dá)情況
        3.3.2 基于Cell Ranger(graph-based)算法的單細(xì)胞群的分類情況
        3.3.3 基于Cell ranger算法的敲低Fstl1后肝星狀細(xì)胞功能富集分析
主要結(jié)論與展望
    主要結(jié)論
    展望
致謝
參考文獻(xiàn)
附錄 :作者在攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的論文


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Metformin attenuates motility,contraction,and fibrogenic response of hepatic stellate cells in vivo and in vitro by activating AMP-activated protein kinase[J]. Zhen Li,Qian Ding,Li-Ping Ling,Ying Wu,Dong-Xiao Meng,Xiao Li,Chun-Qing Zhang.  World Journal of Gastroenterology. 2018(07)



本文編號：3719222