目的:探討ERK-1基因靜默能否下調(diào)HSC ERK-1的表達并影響HSC的生物學(xué)活性;以及ERK信號通路、瘦素與HSC生物學(xué)功能的關(guān)系。方法:①將篩選出的ERK-1 siRNA轉(zhuǎn)染HSC-T6,用MTT法測定細胞增殖變化、RT-PCR法檢測Ⅰ以及Ⅲ型膠原mRNA、TIMP-1 mRNA表達、ELISA法測定HSCⅢ型膠原分泌的變化、流式細胞術(shù)檢測分析細胞增殖和凋亡等生物學(xué)特性的影響。②構(gòu)建二甲基亞硝胺損傷肝纖維化大鼠模型,RT-PCR檢測不同時期纖維化肝臟組織中瘦素mRNA變化;用免疫組化SABC法檢測相應(yīng)的纖維化肝組織中瘦素和Ⅰ、Ⅲ膠原的表達。③瘦素刺激HSC-T6后,Western blot法檢測HSC ERK-1/2、pERK（磷酸化ERK）-1/2的變化,ELISA法測定HSC合成Ⅲ型膠原的含量。另外,先進行ERK-1 RNAi然后再加入瘦素刺激HSC-T6,觀察ERK-1/2、pERK-1/2表達及HSCⅢ型膠原合成的變化。結(jié)果:①189 siRNA對ERK-1表達有較好的抑制效率,穩(wěn)定性最好,并可持續(xù)72 h。②HSC轉(zhuǎn)染ERK基因靜默后第4 d始,細胞增殖明顯慢于對照組（... 

【文章頁數(shù)】：2 頁


本文編號：3678198