目的:本研究利用細(xì)胞學(xué)實驗,選擇Caco2細(xì)胞,穩(wěn)定轉(zhuǎn)染NHERF4后,運(yùn)用PI3K/AKT信號激動劑及抑制劑上調(diào)和下調(diào)PI3K/AKT信號通路,了解NHERF4表達(dá)和細(xì)胞內(nèi)定位,觀察分析NHERF4對PI3K/AKT-SLC26A3作用的影響,從而分析UC中NHERF4對SLC26A3表達(dá)的影響奠定細(xì)胞學(xué)實驗基礎(chǔ)。方法:1.利用慢病毒LV-NHERF4感染Caco-2細(xì)胞,經(jīng)嘌呤霉素篩后,獲得實驗所需的穩(wěn)定轉(zhuǎn)染NHERF4的Caco-2細(xì)胞株。2.利用未轉(zhuǎn)染NHERF4的Caco-2細(xì)胞和轉(zhuǎn)染NHERF4質(zhì)粒的Caco-2細(xì)胞,分別給予不同濃度的IGF-1試劑,加藥濃度依次為0.1ug/m L、0.2ug/m L、0.4ug/m L、1ug/m L、2ug/m L、3ug/m L,觀察NHERF4和SLC26A3蛋白表達(dá)量,分析NHERF4對PI3K/AKT-SLC26A3作用的影響。3.利用未轉(zhuǎn)染NHERF4的Caco-2細(xì)胞和轉(zhuǎn)染NHERF4質(zhì)粒的Caco-2細(xì)胞,分別給予不同濃度的LY294002試劑,加藥濃度依次為1u M、2u M、3u M、4u M、5u M、6u M。觀... 

【文章頁數(shù)】：52 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
英文縮略語表
前言
第一部分 利用慢病毒載體構(gòu)建NHERF4 過表達(dá)Caco-2 穩(wěn)定細(xì)胞株
    一、實驗材料
        1.1 細(xì)胞株和NHERF4 慢病毒載體
        1.2 主要試劑
        1.3 主要實驗儀器
        1.4 主要溶液及配制方法
    二、實驗方法
        2.1 慢病毒LV-NHERF4 載體的構(gòu)建及鑒定
        2.2 Caco-2 細(xì)胞培養(yǎng)
        2.3 Caco-2 細(xì)胞計數(shù)
        2.4 慢病毒的感染
        2.5 倒置熒光顯微鏡下觀察NHERF4 感染效率及定位表達(dá)
    三、實驗結(jié)果
    四、討論
第二部分 PI3K/AKT信號通路對NHERF4及SLC26A3 的影響
    一、實驗材料
        1.1 細(xì)胞株
        1.2 主要試劑
        1.3 主要實驗儀器
        1.4 主要實驗試劑
    二、實驗方法
        2.1 Caco-2 細(xì)胞培養(yǎng)
        2.2 實驗分組
        2.3 Western blot法檢測Caco-2 細(xì)胞中NHERF4及SLC26A3 蛋白的表達(dá)
    三、實驗結(jié)果
    四、討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
致謝
作者簡介
附件


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號：3668174