背景:腸纖維化是炎癥性腸病的最為常見(jiàn)的并發(fā)癥,機(jī)制不明,且易導(dǎo)致腸腔狹窄,手術(shù)仍是目前治療目前狹窄的唯一手段,因而在腸纖維化形成早期使用藥物干預(yù),成為預(yù)防或延緩疾病進(jìn)程的重要手段,但目前臨床上尚未有理想的藥物。康復(fù)新液（KFX）是美洲大蠊干燥蟲(chóng)體提取物,近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn),該藥具有抗炎、抗纖維化及良好的促進(jìn)組織愈合等作用,不良反應(yīng)低。鑒于臨床上腸纖維化多由長(zhǎng)期反復(fù)炎癥損傷所引發(fā),因而,康復(fù)新液在防治腸纖維化方面的作用研究具有一定探討價(jià)值。目的:本研究通過(guò)體內(nèi)、體外實(shí)驗(yàn),探討KFX在炎癥相關(guān)性腸纖維化模型中的作用及其可能的機(jī)制。方法:1、100只雌性BALB/c小鼠分為正常組,TNBS模型組,KFX（0.1 ml/20g、0.2 ml/20g、0.4 ml/20g）組,5-氨基水楊酸組（5-ASA組,40 mg/kg）。除正常組外,其余各組小鼠每周灌腸給予TNBS+45%乙醇進(jìn)行造模,TNBS劑量分別為1.0mg,1.5 mg和2.0 mg,連續(xù)灌腸6周建立炎癥相關(guān)性腸纖維化模型,每周灌腸一次,每個(gè)劑量TNBS各給予兩周。ELISA法檢測(cè)血清IL-10和IL-17水平;HE染色法和Masss... 

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

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1 引言
第一部分 康復(fù)新液對(duì)TNBS所致的腸纖維化的作用以及TGF-β1/Smads通路的影響
    1 實(shí)驗(yàn)材料
        1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        1.2 主要藥品與試劑
        1.3 實(shí)驗(yàn)儀器
    2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.1 動(dòng)物的模型建立和給藥
        2.2 小鼠體重及腸重指標(biāo)
        2.3 H&E染色觀察小鼠腸道病理學(xué)變化
        2.4 Masson染色觀察腸組織纖維化程度
        2.5 免疫組化法檢測(cè)腸組織中α-SMA的表達(dá)
        2.6 酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測(cè)定小鼠血清中IL-10、IL-17 的含量
        2.7 Real time-PCR測(cè)定組織中mRNA表達(dá)
        2.8 Western Blot免疫印跡法測(cè)定蛋白表達(dá)
    3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
第二部分 康復(fù)新液對(duì)TGF-β1 誘導(dǎo)的CCD-18Co細(xì)胞中纖維化基因與蛋白表達(dá)的影響
    1 實(shí)驗(yàn)材料
        1.1 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞
        1.2 主要藥品與試劑
        1.3 實(shí)驗(yàn)儀器
    2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.1 溶液配制
        2.2 細(xì)胞的培養(yǎng)、傳代、凍存和復(fù)蘇
        2.3 觀察不同濃度TGF-β1 作用于CCD-18Co細(xì)胞纖維化狀態(tài)
        2.4 MTT實(shí)驗(yàn)
        2.5 細(xì)胞實(shí)驗(yàn)造模及分組
        2.6 Real time-PCR實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞中α-SMA和 Collagen I的 mRNA表達(dá)
        2.7 Western blot法檢測(cè)細(xì)胞中α-SMA和 Collagen I蛋白表達(dá)
    3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
4 結(jié)果
    4.1 KFX對(duì)小鼠的一般情況和腸道形態(tài)學(xué)影響
    4.2 KFX對(duì)小鼠腸道病理學(xué)影響
    4.3 KFX對(duì) TNBS誘導(dǎo)的腸纖維化小鼠血清中IL-10和IL-17 水平的影響
    4.4 KFX對(duì) TNBS誘導(dǎo)的腸纖維化小鼠腸道纖維化指標(biāo)的影響
    4.5 CCD-18Co細(xì)胞纖維化狀態(tài)
    4.6 MTT法篩選KFX對(duì) CCD-18Co細(xì)胞的作用濃度
    4.7 KFX對(duì) TGF-β1 誘導(dǎo)的CCD-18Co細(xì)胞中α-SMA和 Collagen I的mRNA和蛋白表達(dá)的影響
    4.8 KFX對(duì) TNBS誘導(dǎo)的腸纖維化小鼠腸組織中TGF-β1/Smads通路關(guān)鍵分子mRNA和蛋白表達(dá)的影響
5 討論
6 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附錄
致謝
綜述
    參考文獻(xiàn)


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]美洲大蠊化學(xué)成分和藥理活性[J]. 張慧琴,姚敏,吳道勛,施米麗,劉熙.  動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展. 2018(03)
[2]Periplaneta americana extract used in patients with systemic inflammatory response syndrome[J]. Hong-wei Zhang,Li-you Wei,Gang Zhao,Ya-jing Yang,Shu-zheng Liu,Zhen-yu Zhang,Zhang Jing,Yan-ling Hu.  World Journal of Emergency Medicine. 2016(01)
[3]美洲大蠊提取物含藥血清體外抗肝纖維化的實(shí)驗(yàn)研究[J]. 李春艷,陳衍杰,李樹(shù)楠,劉光明,賴泳.  中藥材. 2013(05)
[4]Cellular and molecular mechanisms of intestinal fibrosis[J]. Silvia Speca,Ilaria Giusti,Florian Rieder,Giovanni Latella.  World Journal of Gastroenterology. 2012(28)
[5]炎性腸病營(yíng)養(yǎng)支持治療進(jìn)展[J]. 彭俊生,向軍.  中國(guó)實(shí)用外科雜志. 2012(06)
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[7]造模因素對(duì)TNBS致大鼠潰瘍性結(jié)腸炎模型的影響[J]. 李茹柳,遲莉,郭文峰,王桂香,王靜,陳蔚文.  中藥藥理與臨床. 2007(06)
[8]康復(fù)新液對(duì)家兔創(chuàng)傷愈合的影響[J]. 李珊瑚,李勇敏,彭淑珍.  臨床和實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志. 2006(06)



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