目的:構(gòu)建能表達(dá)靶向腎母細(xì)胞瘤過度表達(dá)基因（NOV）的小干擾RNA（siRNA）的重組質(zhì)粒,研究NOV對大鼠肝星狀細(xì)胞（HSC）活化、增殖、凋亡、分泌細(xì)胞外基質(zhì)（ECM）的影響方法:以NOV為目的基因,以質(zhì)粒psiRNA- hHlneo為載體,構(gòu)建能在真核細(xì)胞中表達(dá)的靶向NOV的siRNA的重組質(zhì)粒psiRNA （psiRNA1,2,3）和陰性對照重組質(zhì)粒pconsiRNA.限制性酶切和測序鑒定構(gòu)建成功后,脂質(zhì)體介導(dǎo)重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染HSC,依據(jù)轉(zhuǎn)染質(zhì)粒的不同將HSC分為psiRNA1組、psiRNA2組、psiRNA3組、陰性對照pconsiRNA組,并以未轉(zhuǎn)染重組質(zhì)粒的HSC為空白對照組.半定量RT-PCR檢測HSC的NOV、α-平滑肌肌動蛋白（α-SMA）、Ⅰ型膠原、Ⅲ型膠原mRNA表達(dá)情況,Western blot檢測α-SMA蛋白表達(dá),MTT法檢測細(xì)胞增殖,流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞凋亡.結(jié)果:限制性酶切和測序鑒定表明成功構(gòu)建了NOVsiRNA表達(dá)質(zhì)粒:與陰性對照組相比,轉(zhuǎn)染外源重組質(zhì)粒psiRNA2的HSC內(nèi)NOV、α-SMA的mRNA表達(dá)水平下降（73.0% vs 23.2%,51.4... 

【文章頁數(shù)】：7 頁

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]大鼠肝星狀細(xì)胞系的建立及其生物學(xué)特性的研究[J]. 冷希圣,翁山耕,李濤,魏玉華,彭吉潤,杜如昱.  解剖學(xué)報(bào). 2003(03)



本文編號：3655190