目的通過(guò)對(duì)HepG2細(xì)胞膜上乙型肝炎病毒（Hepatitis B Virus, HBV）前S1區(qū)（preS1）結(jié)合蛋白的分離并進(jìn)行質(zhì)譜鑒定,以及對(duì)preS1與鑒定出的蛋白在細(xì)胞膜水平上和體外的相互作用進(jìn)行研究,從而鑒定preS1在HepG2細(xì)胞膜上的結(jié)合蛋白,為繼續(xù)深入探索乙型肝炎病毒的肝細(xì)胞膜受體進(jìn)而揭示HBV的入侵機(jī)制打下基礎(chǔ)。策略與方法1. HepG2細(xì)胞膜上preS1結(jié)合蛋白的分離:利用基因重組技術(shù)將HBV preS1基因與GST標(biāo)簽在原核表達(dá)系統(tǒng)中融合表達(dá);以融合蛋白GST-preS1為探針蛋白,與生物素標(biāo)記膜蛋白的HepG2全細(xì)胞裂解液孵育,利用pull down技術(shù)分離HepG2細(xì)胞膜上與preS1結(jié)合的蛋白。2.對(duì)分離出的preS1結(jié)合蛋白進(jìn)行質(zhì)譜鑒定:利用液相色譜/質(zhì)譜聯(lián)用離子阱質(zhì)譜儀進(jìn)行質(zhì)譜分析,儀器根據(jù)質(zhì)譜分析獲得的肽序列譜圖自動(dòng)進(jìn)行數(shù)據(jù)庫(kù)搜索,采用Spectrum Mill proteomics software在SwissPort數(shù)據(jù)庫(kù)中搜索針對(duì)人的序列,通過(guò)預(yù)設(shè)條件的篩選從而鑒定出相應(yīng)蛋白。3.對(duì)鑒定出的蛋白進(jìn)行原核表達(dá):從數(shù)據(jù)庫(kù)中獲得目的蛋白的基因序列,利... 

【文章頁(yè)數(shù)】：96 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
英漢縮略語(yǔ)名詞對(duì)照
摘要
ABSTRACT
前言
    參考文獻(xiàn)
第一部分 HEPG2 細(xì)胞膜上 HBV 包膜蛋白前 S1 區(qū)結(jié)合蛋白的分離
    1 材料與方法
    2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    3 討論
    參考文獻(xiàn)
第二部分 前 S1 區(qū)結(jié)合蛋白的質(zhì)譜鑒定
    1 材料與方法
    2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    3 討論
    參考文獻(xiàn)
第三部分 前 S1 區(qū)結(jié)合蛋白的原核表達(dá)與純化
    1 材料與方法
    2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    3 討論
    參考文獻(xiàn)
第四部分 GRP78 與 PRES1 相互作用分析
    第一節(jié) FRET 驗(yàn)證細(xì)胞膜上 PRES1 與 GRP78 的結(jié)合
        1 材料和方法
        2 結(jié)果
        3 討論
        參考文獻(xiàn)
    第二節(jié) GRP78 與 PRES1 體外相互作用分析
        1 材料與方法
        2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3 討論
        參考文獻(xiàn)
全文總結(jié)
文獻(xiàn)綜述
參考文獻(xiàn)
致謝
攻讀博士學(xué)位期間發(fā)表論文
攻讀學(xué)位期間參加學(xué)術(shù)會(huì)議


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Viral and cellular determinants involved in hepadnaviral entry[J]. Dieter Glebe,Stephan Urban.  World Journal of Gastroenterology. 2007(01)
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[3]FRET技術(shù)及其在蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)分子相互作用研究中的應(yīng)用[J]. 王進(jìn)軍,陳小川,邢達(dá).  生物化學(xué)與生物物理進(jìn)展. 2003(06)

博士論文
[1]乙型肝炎病毒包膜蛋白受體的分離及其識(shí)別位點(diǎn)的鑒定[D]. 張君.重慶醫(yī)科大學(xué) 2007



本文編號(hào)：3653889