發(fā)布時間：2022-06-28 08:24

　　目的通過對HepG2細胞膜上乙型肝炎病毒（Hepatitis B Virus, HBV）前S1區(qū)（preS1）結(jié)合蛋白的分離并進行質(zhì)譜鑒定,以及對preS1與鑒定出的蛋白在細胞膜水平上和體外的相互作用進行研究,從而鑒定preS1在HepG2細胞膜上的結(jié)合蛋白,為繼續(xù)深入探索乙型肝炎病毒的肝細胞膜受體進而揭示HBV的入侵機制打下基礎(chǔ)。策略與方法1. HepG2細胞膜上preS1結(jié)合蛋白的分離:利用基因重組技術(shù)將HBV preS1基因與GST標(biāo)簽在原核表達系統(tǒng)中融合表達;以融合蛋白GST-preS1為探針蛋白,與生物素標(biāo)記膜蛋白的HepG2全細胞裂解液孵育,利用pull down技術(shù)分離HepG2細胞膜上與preS1結(jié)合的蛋白。2.對分離出的preS1結(jié)合蛋白進行質(zhì)譜鑒定:利用液相色譜/質(zhì)譜聯(lián)用離子阱質(zhì)譜儀進行質(zhì)譜分析,儀器根據(jù)質(zhì)譜分析獲得的肽序列譜圖自動進行數(shù)據(jù)庫搜索,采用Spectrum Mill proteomics software在SwissPort數(shù)據(jù)庫中搜索針對人的序列,通過預(yù)設(shè)條件的篩選從而鑒定出相應(yīng)蛋白。3.對鑒定出的蛋白進行原核表達:從數(shù)據(jù)庫中獲得目的蛋白的基因序列,利... 

【文章頁數(shù)】：96 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
英漢縮略語名詞對照
摘要
ABSTRACT
前言
    參考文獻
第一部分 HEPG2 細胞膜上 HBV 包膜蛋白前 S1 區(qū)結(jié)合蛋白的分離
    1 材料與方法
    2 實驗結(jié)果
    3 討論
    參考文獻
第二部分 前 S1 區(qū)結(jié)合蛋白的質(zhì)譜鑒定
    1 材料與方法
    2 實驗結(jié)果
    3 討論
    參考文獻
第三部分 前 S1 區(qū)結(jié)合蛋白的原核表達與純化
    1 材料與方法
    2 實驗結(jié)果
    3 討論
    參考文獻
第四部分 GRP78 與 PRES1 相互作用分析
    第一節(jié) FRET 驗證細胞膜上 PRES1 與 GRP78 的結(jié)合
        1 材料和方法
        2 結(jié)果
        3 討論
        參考文獻
    第二節(jié) GRP78 與 PRES1 體外相互作用分析
        1 材料與方法
        2 實驗結(jié)果
        3 討論
        參考文獻
全文總結(jié)
文獻綜述
參考文獻
致謝
攻讀博士學(xué)位期間發(fā)表論文
攻讀學(xué)位期間參加學(xué)術(shù)會議


【參考文獻】：
期刊論文
[1]Viral and cellular determinants involved in hepadnaviral entry[J]. Dieter Glebe,Stephan Urban.  World Journal of Gastroenterology. 2007(01)
[2]Expression and purification of the complete PreS region of hepatitis B Virus[J]. Qiang Deng, Yu-Ying Kong, You-Hua Xie, Yuan Wang, State Key Laboratory of Molecular Biology, Institute of Biochemistry and Cell Biology, Shanghai Institutes of Life Science, Chinese Academy of Sciences, Shanghai 200031, China Qiang Deng, You-Hua Xie, Yuan Wang, Sino-France Center for Life Science and Genome Research, Shanghai 200031, China.  World Journal of Gastroenterology. 2005(20)
[3]FRET技術(shù)及其在蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)分子相互作用研究中的應(yīng)用[J]. 王進軍,陳小川,邢達.  生物化學(xué)與生物物理進展. 2003(06)

博士論文
[1]乙型肝炎病毒包膜蛋白受體的分離及其識別位點的鑒定[D]. 張君.重慶醫(yī)科大學(xué) 2007



本文編號：3653889