目的:構(gòu)建表達(dá)乙肝病毒核心抗原（HBcAg）的復(fù)制缺陷型重組腺病毒載體,將其分別轉(zhuǎn)染健康人及乙肝病毒攜帶者外周血單個(gè)核細(xì)胞,觀察其刺激產(chǎn)生α干擾素水平并與TLR9的天然配體CpG ODN 2006刺激效果進(jìn)行比較,以初步探討乙型肝炎病毒感染免疫識(shí)別狀態(tài)及乙肝病毒感染慢性化機(jī)制。方法:擴(kuò)增乙肝病毒（HBV）C基因片段,亞克隆到穿梭質(zhì)粒pAdTrack-CMV上,與5型腺病毒骨架質(zhì)粒pAdeasy-1共同電轉(zhuǎn)化大腸桿菌BJ5183內(nèi)進(jìn)行同源重組,經(jīng)卡那霉素抗性篩選和酶切鑒定篩選出攜帶（HBV）C區(qū)基因的重組腺病毒載體,用脂質(zhì)體包裹PacⅠ酶切線性化的重組質(zhì)粒,轉(zhuǎn)染到293T細(xì)胞內(nèi)進(jìn)行重組腺病毒的包裝,獲得具有感染能力的重組腺病毒顆Ad-HBc。應(yīng)用密度梯度離心法從健康人（HBsAg陰性）及乙肝病毒攜帶者外周靜脈血中分離出單個(gè)核細(xì)胞,分為四組加入干預(yù)因素:Ad-HBc組、CpG ODN 2006組、Ad-HBc+CpG ODN 2006組和空白對(duì)照組,孵育48小時(shí)后采用ELISA檢測(cè)各組細(xì)胞培養(yǎng)上清中IFN-α水平。結(jié)果:在健康人中,與空白對(duì)照組比較,Ad-HBc+CpG ODN 2006組... 

【文章來源】：南昌大學(xué)江西省211工程院校

【文章頁數(shù)】：37 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第1章 前言
第2章 材料和方法
    2.1 研究對(duì)象及篩選標(biāo)準(zhǔn)
    2.2 實(shí)驗(yàn)材料
    2.3 實(shí)驗(yàn)方法
    2.4 接種
    2.5 ELISA 測(cè)定培養(yǎng)上清中 IFN-α的含量
    2.6 數(shù)據(jù)與統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
第3章 結(jié)果
    3.1 Ad-HBc 對(duì) HEK 293T 細(xì)胞的轉(zhuǎn)染
    3.2 Ad-HBc 對(duì)健康人及乙肝病毒攜帶者外周血單個(gè)核細(xì)胞的轉(zhuǎn)染
    3.3 ELISA 測(cè)定培養(yǎng)上清中 IFN-α的含量
第4章 討論
第5章 結(jié)論與展望
致謝
參考文獻(xiàn)
綜述


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]攜帶乙肝核心抗原基因復(fù)制缺陷型重組腺病毒的高效制備和表達(dá)[J]. 黃呈輝,歐陽玲,江鵬飛,黃建國.  中國醫(yī)學(xué)工程. 2006(06)
[2]Dysfunction of peripheral blood dendritic cells from patients with chronic hepatitis B virus infection[J]. Fu-Sheng Wang Li-He Xing Ming-Xu Liu Chuan-Lin Zhu Hui-Gang Liu Hui-Fen Wang Zhou-Yun Lei Division of Biological Engineering,~2 Fourth Department of Liver Diseases,Beijing Institute of Infectious Diseases,Beijing Hospital of Infectious Diseases,Beijing 100039,China.  World Journal of Gastroenterology. 2001(04)



本文編號(hào)：3644370