近年來(lái),由于全球肥胖病的流行,非酒精性脂肪肝炎（NASH）的患病率正逐年增長(zhǎng),這一疾病的特征是脂肪組織擴(kuò)張,氧化應(yīng)激的激活,炎癥反應(yīng)的增加以及不同程度的纖維化。NASH會(huì)增加肝臟相關(guān)的發(fā)病率和死亡率,并增加其他合并癥的風(fēng)險(xiǎn),由于診斷困難,易被忽視發(fā)展成為肝硬化甚至肝癌,對(duì)人類危害巨大。迄今為止,國(guó)際上治療NASH的主要目標(biāo)仍然是改善脂代謝并預(yù)防疾病的進(jìn)展,但目前沒(méi)有任何干預(yù)措施在NASH的治療方面是完全有效的。這種情況下,開(kāi)發(fā)新靶點(diǎn)新機(jī)制的NASH治療藥物顯得尤為重要。本文主要圍繞KP-2對(duì)NASH這一疾病的作用及機(jī)制展開(kāi)研究,建立NASH體內(nèi)外的小鼠模型與細(xì)胞模型,通過(guò)一系列技術(shù)手段驗(yàn)證了 KP-2對(duì)NASH的改善作用,并初步探究了其作用機(jī)制。KP-2作為一款高效的丁酰膽堿酯酶（BChE）抑制劑,在動(dòng)物模型中可以抑制高脂飲食（HFD）導(dǎo)致的BChE活性增高,該結(jié)論明確了 KP-2的作用靶點(diǎn)。本課題通過(guò)高脂飲食誘導(dǎo)構(gòu)建NASH動(dòng)物模型,高脂喂養(yǎng)三個(gè)月后,連續(xù)腹腔注射KP-2（10mg/Kg）一個(gè)月。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下:1)高脂飲食（HFD）可導(dǎo)致小鼠體重大幅度增加,此外B超提示模型組小鼠肝臟... 

【文章來(lái)源】：廣東工業(yè)大學(xué)廣東省

【文章頁(yè)數(shù)】：65 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略詞表
第一章 緒論
    1.1 非酒精性脂肪肝炎概述
    1.2 非酒精性脂肪肝炎治療現(xiàn)狀
        1.2.1 抗氧化劑
        1.2.2 針對(duì)代謝的NASH治療
        1.2.3 針對(duì)炎癥的NASH療法
        1.2.4 針對(duì)細(xì)胞損傷的NASH治療
        1.2.5 針對(duì)纖維化的NASH療法
    1.3 KP-2及其靶點(diǎn)丁酰膽堿酯酶(BChE)研究現(xiàn)狀
        1.3.1 丁酰膽堿酯酶BChE
        1.3.2 KP-2
        1.3.3 BChE與NASH的相關(guān)性
    1.4 非酒精性脂肪肝炎動(dòng)物模型的研究進(jìn)展及建立方法
    1.5 非酒精性脂肪肝炎細(xì)胞模型的研究進(jìn)展及建立方法
    1.6 本課題的研究意義
第二章 非酒精性脂肪肝炎的動(dòng)物模型
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器
        2.1.3 試劑及藥品
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組及處理
        2.2.2 動(dòng)物組織的BChE活性檢測(cè)
        2.2.3 高分辨率小動(dòng)物超聲影像系統(tǒng)檢測(cè)
        2.2.4 石蠟切片的制備
        2.2.5 肝臟組織HE染色
        2.2.6 血清中TC含量的檢測(cè)
        2.2.7 血清中TG含量的檢測(cè)
        2.2.8 血清中LDL-C含量的檢測(cè)
        2.2.9 血清中SOD活性的檢測(cè)
        2.2.10 血清中MDA活性的檢測(cè)
        2.2.11 谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)的測(cè)定
        2.2.12 谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)的測(cè)定
        2.2.13 肝臟組織脂肪含量的檢測(cè)
        2.2.14 動(dòng)物組織中白細(xì)胞介素1β(IL-1β)的含量測(cè)定
        2.2.15 動(dòng)物組織中白細(xì)胞介素6 (IL-6)的含量測(cè)定
        2.2.16 統(tǒng)計(jì)分析
    2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        2.3.1 KP-2對(duì)BChE的抑制作用檢測(cè)
        2.3.2 小動(dòng)物活體成像檢測(cè)NASH動(dòng)物模型肝臟脂肪的堆積
        2.3.3 不同組小鼠的體重及肝重比
        2.3.4 不同組小鼠的腎周脂肪及附睪脂肪含量
        2.3.5 小鼠肝臟組織切片HE染色
        2.3.6 KP-2對(duì)小鼠血清中血脂及轉(zhuǎn)氨酶的影響
        2.3.7 動(dòng)物血清中氧化應(yīng)激指標(biāo)的檢測(cè)
        2.3.8 KP-2對(duì)肝臟脂肪堆積的影響
        2.3.9 KP-2對(duì)動(dòng)物模型炎癥因子表達(dá)的影響
    2.4 討論
第三章 非酒精性脂肪肝炎的細(xì)胞模型
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.1 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞
        3.1.2 儀器設(shè)備
        3.1.3 試劑及耗材
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 細(xì)胞的培養(yǎng)
        3.2.2 非酒精性脂肪肝細(xì)胞模型的構(gòu)建
        3.2.3 細(xì)胞活率的檢測(cè)
        3.2.4 細(xì)胞內(nèi)脂肪含量的檢測(cè)
        3.2.5 AML12細(xì)胞總RNA提取
        3.2.6 逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA
        3.2.7 AML12細(xì)胞有氧代謝能力檢測(cè)
        3.2.8 統(tǒng)計(jì)分析
    3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.3.1 不同濃度FFA對(duì)AML12細(xì)胞活率及脂肪堆積的影響
        3.3.2 CCK-8檢測(cè)梯度濃度藥物的毒性作用
        3.3.3 KP-2對(duì)NASH模型的細(xì)胞活力影響
        3.3.4 BChE敲除對(duì)NASH模型的細(xì)胞活力影響
        3.3.5 KP-2及BChE敲除對(duì)NASH模型中脂滴堆積的影響
        3.3.6 KP-2及BChE敲除可增強(qiáng)NASH模型下細(xì)胞的線粒體有氧代謝能力
    3.4 討論
結(jié)論與展望
參考文獻(xiàn)
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Genetic factors that affect nonalcoholic fatty liver disease: A systematic clinical review[J]. Tyler J Severson,Siddesh Besur,Herbert L Bonkovsky.  World Journal of Gastroenterology. 2016(29)
[2]中國(guó)非酒精性脂肪性肝病診療指南（2010年修訂版）[J]. 范建高.  中國(guó)醫(yī)學(xué)前沿雜志(電子版). 2012(07)



本文編號(hào)：3641686