發(fā)布時(shí)間：2022-01-22 06:16

　　慢性丙型肝炎患者外周血單個(gè)核細(xì)胞干擾素及相關(guān)基因表達(dá)與干擾素療效關(guān)系的研究丙型肝炎病毒（Hepatitis C Virus，HCV）感染引起的丙型肝炎仍是嚴(yán)重危害人民健康的重要病毒性疾病。丙型肝炎的主要危害性在于患者易轉(zhuǎn)變?yōu)槁愿窝�，并可進(jìn)一步發(fā)展為肝癌（HCC）而死亡。目前Ⅰ型干擾素（下簡稱干擾素）已被臨床廣泛用于慢性丙型肝炎的治療，但尚存在治療效果有限等缺點(diǎn)。雖然國內(nèi)外對(duì)HCV基因結(jié)構(gòu)、功能、致病性及機(jī)體免疫應(yīng)答等已進(jìn)行了大量研究，但迄今仍不十分清楚HCV與干擾素在機(jī)體和細(xì)胞內(nèi)如何相互作用以影響機(jī)體對(duì)干擾素的應(yīng)答。本室曾對(duì)丙型肝炎病毒的有關(guān)基因序列進(jìn)行研究，結(jié)果未發(fā)現(xiàn)相關(guān)氨基酸序列與中國丙型肝炎病人的干擾素療效有關(guān)。因此，有必要進(jìn)一步探討機(jī)體因素與干擾素療效的相關(guān)性。HCV感染機(jī)體后可誘生機(jī)體產(chǎn)生內(nèi)源性干擾素，同時(shí)又可抵抗干擾素的作用。當(dāng)使用外源性干擾素對(duì)病人進(jìn)行治療時(shí)，機(jī)體對(duì)干擾素的應(yīng)答實(shí)際上是病毒，內(nèi)源性干擾素系統(tǒng)與外源性干擾素在體內(nèi)相互作用、平衡的結(jié)果。理論推測，HCV可能通過基因復(fù)制和蛋白表達(dá)對(duì)干擾素通路上的關(guān)鍵環(huán)節(jié)進(jìn)行干預(yù)，使內(nèi)源性干擾素產(chǎn)生不足、信號(hào)通路受阻或干擾素的作... 

【文章來源】：復(fù)旦大學(xué)上海市 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：151 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

RL一slRLS一M質(zhì)粗構(gòu)建示意圖

圖2pRL一TK質(zhì)粒結(jié)構(gòu)示意圖癌細(xì)胞系Huh7細(xì)胞(本室保存)，RePllcon細(xì)胞(含H，能自行復(fù)制并表達(dá)HCV的非結(jié)構(gòu)蛋白Ns3一4A一4B一SA)由本實(shí)驗(yàn)室構(gòu)建保存M細(xì)胞培養(yǎng)基(Invitrogen公司)

生絲漁全叁簽二部分慢性丙型肝炎患者P明cs‘型干擾幸及其合成相關(guān)基因的表達(dá)與干擾素療效的關(guān)12.IRF一7pomoter活性檢測條件的確定(1)IRF一7Promoter活性報(bào)告的特異性檢測:將Huh7細(xì)胞傳入24孔培養(yǎng)板中，密度為4x10勺孔。24h后換新鮮培液，在3個(gè)培養(yǎng)孔中分別轉(zhuǎn)染熒光報(bào)告質(zhì)粒PGVector、RL一8和甩一SM各250ng，同時(shí)各孔轉(zhuǎn)入側(cè)uc質(zhì)粒50ng作為熒光檢測內(nèi)參。繼續(xù)培養(yǎng)24h后，各孔換成無血清的DMEM培液，并加入500側(cè)ml的IFN一，刺激18后，用PLB液100川裂解孔中細(xì)胞，離心后取上清進(jìn)行熒光報(bào)告系統(tǒng)分析分析結(jié)果確認(rèn)RL一8質(zhì)粒中IRF一7Promoter活性特異地受IFN一a調(diào)控，而突變體空載對(duì)IFN一a無反應(yīng)(見圖4A)(2)IRF一7promoter活性報(bào)告的檢測時(shí)間優(yōu)化:RL一8質(zhì)粒和Rlu。質(zhì)粒共轉(zhuǎn)Huh細(xì)胞，分別在IFN一a刺激oh，3h，sh，7h，12h和24h時(shí)檢測熒光。結(jié)果顯示，12h時(shí)I孫一7Promoter活性達(dá)到峰值(見圖4B)，因此I盯一7promoter活性檢測驗(yàn)中IFN一a刺激細(xì)胞的時(shí)間定為12h。


本文編號(hào)：3601692