背景：我國(guó)是HBV感染的高發(fā)區(qū)，約有9300萬(wàn)慢性HBV感染者。HBV感染可引起不同的臨床結(jié)果，包括急性乙肝、慢性HBV攜帶、慢性乙肝、肝衰竭、肝硬化和肝細(xì)胞癌等，其原因主要決定于機(jī)體的免疫應(yīng)答狀態(tài)。人體肝臟含有大量的天然免疫細(xì)胞如NK細(xì)胞（natural killer cells, NK）、 NKT（natural killer Tlymphocytes, NKT）細(xì)胞等，約占整個(gè)肝臟淋巴細(xì)胞的2/3。其中NK細(xì)胞約占30%，NKT細(xì)胞也近30%，而適應(yīng)性免疫T淋巴細(xì)胞亞群僅占30%左右。穿孔素（perforin，又稱pore-forming protein, PFP）是由細(xì)胞毒性細(xì)胞：NK細(xì)胞、NKT細(xì)胞及細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞（cytotoxic T lymphocytes, CTL）分泌的效應(yīng)分子，能在靶細(xì)胞上形成跨膜的孔道，使顆粒酶進(jìn)入靶細(xì)胞胞漿，由此啟動(dòng)凋亡信號(hào)通路，引起肝細(xì)胞損害。因此，NK細(xì)胞、NKT細(xì)胞和CTL細(xì)胞在HBV感染的清除和免疫導(dǎo)致病理?yè)p傷的作用需進(jìn)一步明確。目的：研究慢性HBV感染患者外周血HBV特異性CTL、NK細(xì)胞、NKT細(xì)胞的頻數(shù)、穿孔素量的表達(dá)，與血清... 

【文章來源】：蘇州大學(xué)江蘇省 211工程院校

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

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GAPDH和PFP的實(shí)時(shí)熒光定量PCR動(dòng)態(tài)擴(kuò)增曲線

圖4 GAPDH和PFP的實(shí)時(shí)熒光定量PCR溶解曲線3.數(shù)據(jù)分析1)定量RT-PCR分析PFP mRNA 基因在SACLF患者、CHB患者、HBV攜帶者與正常對(duì)照組之間差異表達(dá)見表1組別 例數(shù) 相對(duì)定量法 2-△CT(x± s)SACLF 患者 25 0.54±0.78CHB 患者 30 0.17±0.20HBV 攜帶者 15 0.061±0.05健康對(duì)照者 10 0.028±0.18注：相對(duì)定量法 2-△CT 計(jì)算，△CT 等于穿孔素基因的 CT 值減去同一樣本中 GAPDH 的 CT 值。SACLF 患者較 CHB 患者 p=0.035；CHB 患者較 HBV 攜帶者 p=0.041；HBV 攜帶者較健康對(duì)照者 p=0.031，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。4）乙肝患者 HBV-DNA 載量與 PFP mRNA 基因表達(dá)的關(guān)系

25 例慢加急性肝衰竭患者死亡組 14 例；存活組 11 例；死亡率達(dá)；56%；兩組穿孔基因表達(dá)，結(jié)果死亡組比存活組高，提示可能穿孔素參與重肝進(jìn)一步損傷。別 例數(shù)相對(duì)定量法2-△CT(x± s) P值亡組 14 1.13±1.12活組 11 0.14±0.19 0.037：相對(duì)定量法 2-△CT 計(jì)算，△CT 等于穿孔素基因的 CT 值減去同一樣本中 GAPDH 的 CT 值。慢性肝炎患者PBMC穿孔素基因表達(dá)與患者血清HBV DNA呈負(fù)相關(guān)，PFPmRN平 SACLF＞CHB＞HBV 攜帶，提示機(jī)體免疫在清除病毒作用又能導(dǎo)致免疫病理?yè)p傷二、免疫組化分析）SACLF 患者、CHB 患者、HBV 攜帶者及健康對(duì)照者單個(gè)核細(xì)胞中穿孔素表達(dá)情見下圖及表；

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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