乙型肝炎病毒（HBV）感染是嚴重影響我國人民健康的重要傳染病。可引起急性、慢性肝炎、肝硬化,并與肝癌的發(fā)生有密切的關(guān)系。目前,對于具體的HBV致�。òC制尚不十分明確。其中,HBV DNA整合于肝細胞基因組被認為是肝細胞損傷、HCC發(fā)生的主要機制之一。HBV是一種嗜肝部分雙鏈DNA病毒,其基因組長約3.2kb,具有4個主要的開放讀碼框架（ORF）,分別命名為S、C、P、X區(qū),HBsAg是由S區(qū)編碼的表面蛋白,其編碼區(qū)長度為681個核苷酸（nt）,有226個氨基酸（aa）。HBV表面抗原蛋白具有多種生物功能,并在部分整合型肝細胞內(nèi)大量表達。為了解HBsAg整合入肝細胞基因組后,肝細胞內(nèi)蛋白質(zhì)表達譜變化,以進一步了解其對肝細胞生長代謝的影響,本研究成功構(gòu)建了HBsAg的真核表達載體并建立穩(wěn)定表達目的蛋白的Chang Liver-HBsAg-EGFP細胞系及空質(zhì)粒對照的Chang Liver-EGFP細胞系,經(jīng)雙向凝膠電泳。應(yīng)用ImageMaster 2DPaltinum 5.1軟件（Amersham）對膠圖進行斑點檢測和匹配。選取差異蛋白質(zhì)點,用MALDI-TOF—MS質(zhì)譜進行分析,獲得... 

【文章來源】：中國人民解放軍醫(yī)學(xué)院北京市

【文章頁數(shù)】：75 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

pEGFP一Nl質(zhì)粒及多克隆位點圖

擴增條帶位于0.5一Ikb之間bP位于預(yù)期目的條帶的位置(圖1一2)121000bP一 678bP~ 500bP一圖1一 2HBV一S基因PCR擴增產(chǎn)物。 1.2PCR產(chǎn)物及pEGFP一Nl酶切產(chǎn)物純化后，酶切產(chǎn)物純化后電泳:符，且條帶清晰無雜帶。8%瓊脂糖凝膠電泳，結(jié)果各目的條帶位置大致與預(yù)期相(圖l一3)洲n食護阮Orp三OFp.NI4。7kb，.skb乍.Okb8花bP

軍醫(yī)進修學(xué)院博士學(xué)位論文圖1一3酶切純化后的目的條帶。從左至右依次為 IkbDNAladder、HBV一S、PEGFP一Nl。1.3目的質(zhì)粒PEG即一N1一HBsAg的初步鑒定:酶切重組質(zhì)粒pEGFP一Nl一HBsAg后得到兩條帶，其中一條帶均位于0.5一Ikb之間，另一條分別位于4一skb之間，根據(jù)插入片斷的大小正確，初步鑒定為目的質(zhì)粒。pE6Fp.N門一S5kb4kb1.Skb1。okb8花bp圖1一4重組質(zhì)粒pEGFP一Nl一HBSAg酶切鑒定電泳圖。1.4目的質(zhì)粒的測序結(jié)果:對含有插入片段的重組質(zhì)粒，進行測序。部分測序結(jié)果見下圖。對測序所得的序列，在去除載體序列后，送至GenBank數(shù)據(jù)庫，以BLAST軟件進行序列相似性比較。我們得到了一個插入片段與HBv一S基因序列(91{929616)完全一致的重組質(zhì)粒。(圖1一5)

【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3599359