維生素D在非酒精性脂肪性肝病中的作用及其機制研究
發(fā)布時間：2022-01-15 01:35
研究背景:非酒精性脂肪性肝�。╪onalcoholic fatty liver disease,NAFLD）是一種脂質(zhì)在肝細(xì)胞中異常沉積的疾病,其發(fā)病機制復(fù)雜,目前尚不十分明確。流行病學(xué)研究表明維生素D的缺乏與NAFLD患病風(fēng)險增加相關(guān),但其中的具體調(diào)節(jié)機制尚不清楚,相關(guān)基礎(chǔ)研究缺乏,本研究旨在探討維生素D及其受體（vitamin D receptor,VDR）在NAFLD中的調(diào)節(jié)作用和具體的分子機制。研究方法和材料:采用人正常肝細(xì)胞系L02,添加棕櫚酸（palmitic acid,PA）至培養(yǎng)基構(gòu)建NAFLD細(xì)胞模型。C57BL/6小鼠喂養(yǎng)高脂飼料（high fat diet,HFD）構(gòu)建動物模型。小鼠飼料添加維生素D和構(gòu)建肝細(xì)胞特異性VDR敲除C57BL/6小鼠探究維生素D和VDR對NAFLD的影響。細(xì)胞上通過培養(yǎng)基添加1,25（OH）2VD3和小干擾RNA敲低VDR來觀察維生素D和VDR對NAFLD的影響。應(yīng)用伊紅-蘇木素染色（Hematoxylin-Eosin,H&E）染色,油紅O染色,肝臟甘油三酯（triglyceride,...
【文章來源】：浙江大學(xué)浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校
【文章頁數(shù)】：134 頁
【學(xué)位級別】：博士
【部分圖文】：
NAFLD細(xì)胞模型評估（*與BSA組比較P<0.05）
浙江大學(xué)博士學(xué)位論文正文第一部分實驗結(jié)果21肝臟相比于SCD組小鼠出現(xiàn)顯著的肝細(xì)胞脂質(zhì)沉積（圖1.2D）。HFD小鼠肝臟甘油三脂（TG）也較SCD組顯著升高（圖1.2E）。HFD組小鼠血清肝細(xì)胞損傷相關(guān)指標(biāo)谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）和谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）也較SCD組明顯上升（圖1.2F）。以上結(jié)果表明小鼠NAFLD動物模型構(gòu)建成功。圖1.2NAFLD動物模型評估（*與SCD組比較P<0.05）1.3.3血維生素D水平在NAFLD中的情況（1）為了明確維生素D是否與NAFLD相關(guān)聯(lián)，我們檢測了參與常規(guī)體檢的人群的血清25-VitD水平，并且根據(jù)腹部B超的診斷將患者分為NAFLD組和正常對照組，按照年齡和性別將兩組進行匹配，統(tǒng)計分析發(fā)現(xiàn)NAFLD患者血清維生素D水平相較于正常對照組是顯著下降的（圖1.3A）。（2）經(jīng)過8周高脂飼料喂養(yǎng)（HFD）的小鼠血清25-VitD水平相比于對照組小鼠也是下降的（圖1.3B）。（3）小鼠在飼料添加維生素D后，小鼠血清25-VitD水平顯著上升（圖1.3B）。
浙江大學(xué)博士學(xué)位論文正文第一部分實驗結(jié)果22圖1.3血維生素D水平在NAFLD中的情況（*與control或者SCD組比較P<0.05；#與HFD組比較P<0.05）1.3.4維生素D對NAFLD小鼠肝臟脂變的影響為了進一步探究維生素D對NAFLD的是否具有改善作用。我們對剛離乳的小鼠在普通飼料里添加維生素D，待到8周齡可以高脂造模時造模時繼續(xù)在高脂飼料中添加維生素D直到8周造模結(jié)束（HFD+VD）。高脂對照組（HFD）小鼠離乳時喂普通飼料，到8周齡可以造模時喂高脂飼料直到造模結(jié)束。我們發(fā)現(xiàn)高脂補充維生素D組小鼠相較于高脂組小鼠，體重明顯減輕（圖1.4A）。高脂補充維生素D組小鼠肝臟蒼白泛黃程度不及高脂組，肝臟體積也較小，質(zhì)地稍韌，肝重和肝體比明顯輕于高脂組（圖1.4B）。H&E染色顯示高脂補充維生素D組小鼠肝臟彌漫性脂變區(qū)域明顯少于對照組小鼠，肝細(xì)胞氣球樣變比例少于高脂組（圖1.4C）。油紅染色表明補充維生素D可以明顯減少高脂造模引起的脂滴沉積（圖1.4D）。并且通過檢測肝臟TG含量，我們發(fā)現(xiàn)維生素D的補充可以明顯減少高脂造模引起的TG升高（圖1.4E）。肝臟TG的合成途徑有脂質(zhì)的從頭合成，這一過程受到多種基因的調(diào)控，其中比較重要的有膽固醇調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白1（sterol-regulatoryelementbindingprotein1，SREBP1），脂肪酸合成酶（fattyacidsynthase，F(xiàn)AS），乙酰輔酶A羧化酶（acetylCoAcarboxylase，
【參考文獻】：
期刊論文
[1]Pathophysiological mechanisms involved in non-alcoholic steatohepatitis and novel potential therapeutic targets[J]. Fátima Higuera-de la Tijera,Alfredo I Servín-Caama?o. World Journal of Hepatology. 2015(10)
本文編號：3589630
【文章來源】：浙江大學(xué)浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校
【文章頁數(shù)】：134 頁
【學(xué)位級別】：博士
【部分圖文】：
NAFLD細(xì)胞模型評估（*與BSA組比較P<0.05）
浙江大學(xué)博士學(xué)位論文正文第一部分實驗結(jié)果21肝臟相比于SCD組小鼠出現(xiàn)顯著的肝細(xì)胞脂質(zhì)沉積（圖1.2D）。HFD小鼠肝臟甘油三脂（TG）也較SCD組顯著升高（圖1.2E）。HFD組小鼠血清肝細(xì)胞損傷相關(guān)指標(biāo)谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）和谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）也較SCD組明顯上升（圖1.2F）。以上結(jié)果表明小鼠NAFLD動物模型構(gòu)建成功。圖1.2NAFLD動物模型評估（*與SCD組比較P<0.05）1.3.3血維生素D水平在NAFLD中的情況（1）為了明確維生素D是否與NAFLD相關(guān)聯(lián)，我們檢測了參與常規(guī)體檢的人群的血清25-VitD水平，并且根據(jù)腹部B超的診斷將患者分為NAFLD組和正常對照組，按照年齡和性別將兩組進行匹配，統(tǒng)計分析發(fā)現(xiàn)NAFLD患者血清維生素D水平相較于正常對照組是顯著下降的（圖1.3A）。（2）經(jīng)過8周高脂飼料喂養(yǎng)（HFD）的小鼠血清25-VitD水平相比于對照組小鼠也是下降的（圖1.3B）。（3）小鼠在飼料添加維生素D后，小鼠血清25-VitD水平顯著上升（圖1.3B）。
浙江大學(xué)博士學(xué)位論文正文第一部分實驗結(jié)果22圖1.3血維生素D水平在NAFLD中的情況（*與control或者SCD組比較P<0.05；#與HFD組比較P<0.05）1.3.4維生素D對NAFLD小鼠肝臟脂變的影響為了進一步探究維生素D對NAFLD的是否具有改善作用。我們對剛離乳的小鼠在普通飼料里添加維生素D，待到8周齡可以高脂造模時造模時繼續(xù)在高脂飼料中添加維生素D直到8周造模結(jié)束（HFD+VD）。高脂對照組（HFD）小鼠離乳時喂普通飼料，到8周齡可以造模時喂高脂飼料直到造模結(jié)束。我們發(fā)現(xiàn)高脂補充維生素D組小鼠相較于高脂組小鼠，體重明顯減輕（圖1.4A）。高脂補充維生素D組小鼠肝臟蒼白泛黃程度不及高脂組，肝臟體積也較小，質(zhì)地稍韌，肝重和肝體比明顯輕于高脂組（圖1.4B）。H&E染色顯示高脂補充維生素D組小鼠肝臟彌漫性脂變區(qū)域明顯少于對照組小鼠，肝細(xì)胞氣球樣變比例少于高脂組（圖1.4C）。油紅染色表明補充維生素D可以明顯減少高脂造模引起的脂滴沉積（圖1.4D）。并且通過檢測肝臟TG含量，我們發(fā)現(xiàn)維生素D的補充可以明顯減少高脂造模引起的TG升高（圖1.4E）。肝臟TG的合成途徑有脂質(zhì)的從頭合成，這一過程受到多種基因的調(diào)控，其中比較重要的有膽固醇調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白1（sterol-regulatoryelementbindingprotein1，SREBP1），脂肪酸合成酶（fattyacidsynthase，F(xiàn)AS），乙酰輔酶A羧化酶（acetylCoAcarboxylase，
【參考文獻】：
期刊論文
[1]Pathophysiological mechanisms involved in non-alcoholic steatohepatitis and novel potential therapeutic targets[J]. Fátima Higuera-de la Tijera,Alfredo I Servín-Caama?o. World Journal of Hepatology. 2015(10)
本文編號：3589630
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