【目的】在體外細胞水平證明肝硬化/慢性肝損傷時肝星狀細胞促進肝細胞向肝祖細胞轉(zhuǎn)化,并通過第二代高通量測序分析、ELISA、免疫組化、免疫熒光、轉(zhuǎn)染等實驗技術(shù),在細胞水平探究肝星狀細胞參與肝細胞向肝祖細胞轉(zhuǎn)化的機制�！痉椒ā康谝�,建立6WTAA、12WCCl₄兩種肝硬化小鼠模型,通過天狼星紅及HE染色評估肝硬化成模情況;第二,采用二步膠原酶灌注的方法提取肝硬化小鼠肝細胞及肝星狀細胞,通過免疫熒光的方法對細胞純度進行鑒定后,使用transwell共培養(yǎng)體系將肝細胞與活化肝星狀細胞共培養(yǎng),48小時后用免疫熒光技術(shù)檢測肝細胞及肝祖細胞標志物的表達情況;第三,對肝星狀細胞共培養(yǎng)組與對照組肝細胞進行第二代高通量測序分析,采用Poly A富集的方法在mRNA水平比較兩組肝細胞中基因表達差異,并通過差異基因的KEGG富集分析,對各信號通路上的差異基因數(shù)目進行統(tǒng)計,提供可能在肝細胞向肝祖細胞轉(zhuǎn)化過程中產(chǎn)生影響的信號通路。在所提供的前20個信號通路中,考慮到活化肝星狀細胞分泌細胞外基質(zhì)導(dǎo)致肝臟組織細胞外基質(zhì)聚集,并結(jié)合前沿文獻,我們選擇ECM-receptor interaction... 

【文章來源】：華中科技大學(xué)湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：54 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

TAA模型組及對照組HE、天狼猩紅染色100X

CCl4模型組及對照組HE、天狼猩紅染色100X

放入細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)。次日用ALB抗體行免疫熒光染色對肝細胞進行鑒定；大約一周后，肝星狀細胞活化，此時用αSMA抗體行細胞熒光檢測，對活化的肝星狀細胞進行鑒定。如下圖2所示：90%以上肝細胞均表達ALB，95%以上肝星狀細胞均表達αSMA，表明提取的原代細胞純度足夠，且培養(yǎng)一周后的肝星狀細胞為活化狀態(tài)。圖2 肝細胞及活化的肝星狀細胞鑒定 200X3.活化的肝星狀細胞與肝細胞共培養(yǎng)結(jié)果：原代肝細胞種板后6小時左右，顯微鏡下觀察肝細胞狀態(tài)及是否貼壁。當肝細胞貼壁后，超凈臺內(nèi)進行細胞換液，分為兩組處理：一組為共培養(yǎng)組，即HSC+組：使用transwell小室結(jié)構(gòu)，上室接種活化的肝星狀細胞，肝星狀細胞不能通過小室，但其


本文編號：3551845