目的:1.體外制作孔徑、孔隙率穩(wěn)定的單純3D多孔殼聚糖微球,然后在單純的殼聚糖微球表面包被大豆蛋白比較兩種微球孔徑、孔隙率及與脂肪干細(xì)胞的細(xì)胞相容性;2.兩種微球中選取與脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞相容性好的微球進(jìn)行普通電鏡掃描、CCK-8增殖實(shí)驗(yàn),觀察脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞在3D多孔殼聚糖微球上的增殖能力;3.將綜合性能較好的3D多孔殼聚糖微球復(fù)合脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞與單純脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞分別移植到大鼠體內(nèi)修復(fù)SD大鼠急性肝損傷。方法:1.3D多孔殼聚糖微球及包被大豆蛋白由北京科技大學(xué)制作,將兩種成品微球放在載物臺(tái)上,噴金后掃描電鏡觀察其直徑、孔徑、孔隙率。將3D多孔殼聚糖微球⁶⁰GO消毒后將10mg微球在離心管內(nèi)與50×10⁴脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞復(fù)合,復(fù)合2h后轉(zhuǎn)入6孔板內(nèi)37℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。在第1、4、7天時(shí)取出微球進(jìn)行活/死染色后在共聚焦顯微鏡下觀察細(xì)胞擴(kuò)增情況;2.取48h SD乳鼠腹股溝處脂肪組織,II型膠原酶磁珠離心法分離、培養(yǎng)、傳代純化大鼠脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞;流式細(xì)胞學(xué)檢測(cè)及鑒定脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞的免疫表型及誘導(dǎo)其成脂、成骨、成軟骨的多向分化潛能;3D多孔... 

【文章來源】：安徽醫(yī)科大學(xué)安徽省

【文章頁數(shù)】：68 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

倒置相差顯微鏡下動(dòng)態(tài)觀察脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞形態(tài)變化

安徽醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文1.4.2 脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞免疫學(xué)表型鑒定結(jié)果將 ADSCs 培養(yǎng)至 P2 代，經(jīng)過抗體染色，流式細(xì)胞儀分后，結(jié)果顯示：99.9%的細(xì)胞 CD29 陽性，97.6% 的細(xì)胞 CD90 陽性，而僅有 4.2% 的細(xì)胞 CD45 陽性，1.8% 的細(xì)胞 CD11b 陽性，證實(shí)培養(yǎng)的細(xì)胞為脂肪來源的 MSCs（見圖 1.2）。

間的延長(zhǎng)脂滴逐漸增多并相互融合，誘導(dǎo)完成后油紅 O 染色可見細(xì)胞內(nèi)脂滴成紅色（見圖 1.3A）。成骨誘導(dǎo) 3 d 后細(xì)胞逐漸成長(zhǎng)梭形，10 d 左右細(xì)胞變?yōu)槎噙呅尾⒖梢娚倭库}結(jié)節(jié)沉積。誘導(dǎo)21d后茜素紅染色可見橘紅色鈣結(jié)節(jié)（見圖1.3B）。成軟骨誘導(dǎo) 3 d 后出現(xiàn)肉眼可見的團(tuán)塊，14 d 后細(xì)胞團(tuán)漸成透明狀，誘導(dǎo) 28 d后經(jīng)脫水、石蠟包埋、脫蠟、脫水及染色后可見軟骨組織內(nèi)酸性黏多糖（見圖1.3C）。圖 1.3 脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞的成骨、成脂、成軟骨誘導(dǎo)分化能力(倒置相差顯微鏡，×100)Figure 1.3 Osteogenic, adipogenic and chondrogenic differentiation of adipose-derivedmesenchymal stem cells (inverted phase contrast microscope, ×100)圖注：圖中 A 為成脂誘導(dǎo) 8 d 后油紅 O 染色，可見細(xì)胞內(nèi)脂滴呈紅色；B 為成骨誘導(dǎo) 21 d后茜素紅染色，可見橘紅色鈣結(jié)節(jié)；C 為成軟骨誘導(dǎo) 28 d 后阿利新藍(lán)染色，可見軟骨組織內(nèi)酸性黏多糖

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]3D打印絲素蛋白/膠原蛋白支架的制備及性能[J]. 孫凱,李瑞欣,范猛,李軼津,董寶康,李暉.  中國組織工程研究. 2017(02)
[2]Outcomes of liver transplantation for end-stage biliary disease: A comparative study with end-stage liver disease[J]. Yan-Hua Lai,Wei-Dong Duan,Qiang Yu,Sheng Ye,Nian-Jun Xiao,Dong-Xin Zhang,Zhi-Qiang Huang,Zhan-Yu Yang,Jia-Hong Dong.  World Journal of Gastroenterology. 2015(20)
[3]Bone marrow-derived mesenchymal stem cell therapy for decompensated liver cirrhosis:A meta-analysis[J]. Xing-Nan Pan,Lian-Qiu Zheng,Xiao-Huan Lai.  World Journal of Gastroenterology. 2014(38)



本文編號(hào)：3538027