目的研究核苷（酸）類似物（NAs）治療慢性乙型肝炎（CHB）過(guò)程中多重耐藥乙型肝炎病毒（HBV）株的演變規(guī)律及多重耐藥形成機(jī)制。方法1)706例接受NAs抗病毒治療過(guò)程中療效不佳的CHB患者,對(duì)其血清HBV DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增后直接測(cè)序,分析其RT區(qū)序列特征;2)準(zhǔn)種分析采用“PCR-克隆-測(cè)序”方法,對(duì)5例臨床資料完整、具有代表性意義的患者的15份血清樣本進(jìn)行研究。并對(duì)其中4例患者連續(xù)血清樣本進(jìn)行動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè),分析不同時(shí)間點(diǎn)血清標(biāo)本HBV毒株準(zhǔn)種特征。結(jié)果1)在不同NAs單藥、序貫或聯(lián)合治療CHB過(guò)程中療效不佳的706例患者中發(fā)現(xiàn)多重耐藥25例�？偟亩嘀啬退帣z出率為3.5%,其中,LAM、ADV雙重耐藥檢出率為72%,LAM、ADV、ETV三重耐藥檢出率為28%;2)多重耐藥的出現(xiàn)不僅可導(dǎo)致病毒學(xué)反彈、生化學(xué)突破、肝炎復(fù)發(fā),還可引起肝衰竭導(dǎo)致患者死亡;3)克隆分析發(fā)現(xiàn)準(zhǔn)種的進(jìn)化過(guò)程可分為以下三種模式:①在序貫治療過(guò)程中,患者體內(nèi)準(zhǔn)種可由對(duì)單藥耐藥克隆進(jìn)化到單藥耐藥克隆和多重耐藥克隆的混合克隆;②序貫治療過(guò)程中準(zhǔn)種從單藥耐藥克隆全部演變?yōu)槎嘀啬退幙寺?③在藥物的選擇壓力下,患者體內(nèi)準(zhǔn)種可... 

【文章來(lái)源】：蘇州大學(xué)江蘇省 211工程院校

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

HBVP基因RT區(qū)核苷類似物耐藥突變位點(diǎn)示意圖

結(jié) 果1. 多重耐藥檢出率及耐藥特征706 例接受 NAs 抗病毒治療過(guò)程中療效不佳的 CHB 患者血清 HBV DNA 進(jìn)行PCR 擴(kuò)增后直接測(cè)序，分析其 RT 區(qū)序列特征，發(fā)現(xiàn)多重耐藥 25 例，總的多重耐藥檢出率為 3.5%。患者體內(nèi)可同時(shí)出現(xiàn)對(duì)左旋核苷組(LAM、LdT)、無(wú)環(huán)磷酸核苷組(ADV)雙重耐藥的毒株，檢出率占總多重耐藥檢出率的 72%，還可同時(shí)出現(xiàn)對(duì)左旋核苷組(LAM、LdT)、無(wú)環(huán)磷酸核苷組(ADV)及環(huán)戊烷組(ETV)三組藥物均耐藥的毒株，檢出率占總多重耐藥檢出率的 28% (表 2)�；颊� RT 區(qū)部分氨基酸序列(169~250 位點(diǎn))與 B、C 型野生型毒株序列比對(duì)圖見(jiàn)圖 2。

者中有 1 例既往未曾服用過(guò) NAs，即預(yù)存多重耐藥株(rtV207I+rtV214E)；LdT、LAM單藥誘導(dǎo)多重耐藥分別為 1 例、3 例；LAM-ADV、LAM-ETV 和 ADV-LdT 單藥序貫誘導(dǎo)多重耐藥分別為 9 例、2 例和 1 例；LAM-ADV-ETV 單藥序貫誘導(dǎo)多重耐藥 1 例；另有 2 例為 LAM-ADV 單藥序貫?zāi)退幒笥?LAM+ADV 或 LdT+ADV 聯(lián)合治療誘導(dǎo)多重耐藥(詳見(jiàn)表 2)。2. PCR-克隆-測(cè)序準(zhǔn)種組成分析采用“PCR-克隆-測(cè)序”方法對(duì) 5 例臨床資料較完整、具有代表性意義的患者的 15 份血清樣本進(jìn)行克隆分析。并對(duì)其中 4 例患者連續(xù)血清樣本進(jìn)行動(dòng)態(tài)研究。HBV P 基因 RT 區(qū)目的片段經(jīng) PCR 擴(kuò)增、純化、連接和轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)菌后，在 LB 平板上獲得數(shù)十～數(shù)千個(gè)轉(zhuǎn)化克隆，其中 90％以上為白色菌落(圖 3)。每份標(biāo)本隨機(jī)挑選 10~25 個(gè)克隆行 PCR 定量檢測(cè)，90％以上含有插入片段(圖 4)，或進(jìn)行普通 PCR 擴(kuò)增后電泳鑒定，與 PCR 定量檢測(cè)所得結(jié)論一致(圖 5)。選取 PCR 驗(yàn)證陽(yáng)性的克隆用于測(cè)序，共測(cè)序 193 個(gè)克隆。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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