目的 探究CX3CL1/CCL26-CX3CR1通路在原發(fā)性膽汁性膽管炎（Primary Biliary Cholangitis,PBC）發(fā)病機制中的作用。方法 收集PBC患者和健康對照外周血標本,分離血漿和外周血單個核細胞（Peripheral Blood Mononuclear Cells,PBMCs）。采用 ELISA 法檢測血漿 CX3CL1和CCL26水平,通過流式細胞分析術(shù)測定PBMC各淋巴細胞亞群表面CX3CR1和CCR3的表達情況。通過Transwell體系檢測CX3CL1和CCL26對各淋巴細胞亞群的趨化作用。利用流式細胞內(nèi)染色技術(shù)測定膜結(jié)合型CX3CL1、游離型CX3CL1和CCL26刺激各淋巴細胞亞群分泌IFN-γ和IL-4的能力。結(jié)果 共納入PBC患者59例,平均年齡51.7±2.8歲,女性與男性比例53:6。納入年齡、性別與患者基本匹配的健康對照54例。PBC患者CD4+T細胞CX3CR1表達水平顯著高于健康對照（17.0±13.0%vs7.8±3.6%,p<0.001）,且這一差異主要來自于其 CD28-的非功能亞群（65.9±22.3%vs36.0±... 

【文章來源】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院北京市 211工程院校 985工程院校

【文章頁數(shù)】：78 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

圖１?ＣＸ３ＣＬ１?ＥＬＩＳＡ標準品倍比稀釋示例??

（圖片來源：Ｒ＆Ｄ?Ｓｙｓｔｅｍｓ?ＣＣＬ２６?ＥＬＩＳ?Ａ試劑盒說明書）??３．３．４樣品檢測??（１）每孔加入１０（＾１樣品或標準品，每個樣品均設(shè)置副孔，記錄每孔樣品信息，??１５ｍｉｎ內(nèi)完成加樣；??（２）用薄膜密封，室溫下孵育２小時；??（３）洗板機洗板：每孔洗４遍，每遍３００［〇１?Ｗａｓｈ?Ｂｕｆｆｅｒ，浸泡３０ｓ。最后一遍洗??完后，將９６孔板倒扣于吸水紙上，用力拍打使９６孔板充分印干；??（４）排槍每孔加入１００＾１?Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ?Ａｎｔｉｂｏｄｙ，用新的薄膜密封，室溫下孵育２小??時；??（５）重復(fù)步驟３中的洗板過程；??（６）排槍每孔加入１０〇ｎｌＳｔｒｅｐｔａｖｉｄｉｎ－ＨＲＰ工作液，用新的薄膜密封，室溫下避光??孵育２０ｍｉｎ；??（７）配置?Ｓｕｂｓｔｒａｔｅ?Ｓｏｌｕｔｉｏｎ?（ｌｘ）：避光，Ｃｏｌｏｒ?Ｒｅａｇｅｎｔｓ?Ａ?和?Ｂ?各取?１２ｍｌ?等體積??混合，１５ｍｉｎ內(nèi)使用；??

技術(shù)路線圖

【參考文獻】：
期刊論文
[1]Primary biliary cirrhosis: From bench to bedside[J]. Elias Kouroumalis,George Notas.  World Journal of Gastrointestinal Pharmacology and Therapeutics. 2015(03)
[2]Chemokines and Chemokine Receptors:Their Manifold Roles in Homeostasis and Disease[J]. Pablo Iribarren.  Cellular & Molecular Immunology. 2004(02)



本文編號：3523795