目的探討Smurf泛素化機(jī)制對(duì)肝纖維化發(fā)生、發(fā)展的影響,為抗纖維化靶向治療開辟一條新途徑。方法將對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期一定密度的肝星狀細(xì)胞（HSC）,按實(shí)驗(yàn)分組。A組:DMEM培養(yǎng)液+HSC細(xì)胞+轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β（TGF-β）（濃度為0 ng/mL）;B組:DMEM培養(yǎng)液+HSC細(xì)胞+TGF-β（濃度為1 ng/mL）;C組:DMEM培養(yǎng)液+HSC細(xì)胞+TGF-β（濃度為2.5 ng/mL）;D組:DMEM培養(yǎng)液+HSC細(xì)胞+TGF-β（濃度為5ng/mL）;E組:DMEM培養(yǎng)液+HSC細(xì)胞+TGF-β（濃度為10 ng/mL）;F組:DMEM培養(yǎng)液+HSC細(xì)胞+TGF-β（濃度為5 ng/mL）+硼替佐米40 ng/mL。各組細(xì)胞均接種在24孔培養(yǎng)板,依次加入不同濃度TGF-β,并以蛋白酶體抑制劑硼替佐米作為阻斷劑,探討Smurf在肝纖維化中的作用,培養(yǎng)一段時(shí)間后采用免疫組化方法檢測(cè)Smurf1、Smurf2、Smad7的表達(dá)及α-平滑肌肌動(dòng)蛋白（α-SMA）的表達(dá),RT-PCR檢測(cè)膠原的表達(dá),TGF-β的濃度梯度為0、1、2.5、5、10 ng/mL。每組均設(shè)3個(gè)復(fù)孔,并至少重復(fù)2次以上。結(jié)果... 

【文章來源】：廣東醫(yī)學(xué). 2017,38(06)北大核心

【文章頁數(shù)】：5 頁

【部分圖文】：

活化的HSC表達(dá)α－SMA(×200)

圖2各組肝星狀細(xì)胞Smurf1、Smurf2、Smad7的表達(dá)(×400)2．3不同纖維化程度的肝組織中Smurf的表達(dá)差異在肝組織中Smurf2的表達(dá)隨著肝纖維化的進(jìn)展，表達(dá)呈下調(diào)趨勢(shì)，與肝組織免疫組化的結(jié)果一致。見表4和圖3。表4不同纖維化程度的肝組織中Smurf的表達(dá)差異樣品蛋白量吸光度值稀釋蛋白量(μL)原蛋白量(μL)150μg(μL)H2Oloading14．460．1112．2311．1413．472．53426．350．1433．1715．879．456．55434．400．112．2010．9913．652．35445．520．1292．7613．8010．875．13455．700．1322．8514．2510．535．47467．060．1553．5317．658．507．50475．760．1332．8814．3910．425．58483．920．1021．969．8115．290．7142．4不同濃度硼替佐米對(duì)HSC膠原生成的影響加入硼替佐米40ng/mL后，Smurf1、Smurf2的表達(dá)沒有顯著變化(P＞0.05)，而Smad7的低表達(dá)受到明顯抑制(P＜0.05);加入蛋白酶體抑制劑后膠原的生成受到抑制。見表5。圖3不同纖維化程度的肝組織中Smurf的表達(dá)3討論肝纖維化是由各種致病因子作用所致肝內(nèi)膠原結(jié)締組織異常增生，以肝內(nèi)彌漫性或局灶性細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)過度沉積為病理特征，可為漸變發(fā)展的漫長(zhǎng)過程，是肝硬化必經(jīng)的病理階段，也是肝癌常見的伴隨環(huán)節(jié)［2］。現(xiàn)在已證實(shí)，HSC的激活以及HSC激活后異常表達(dá)ECM是肝纖維化發(fā)生、發(fā)展的兩個(gè)關(guān)鍵環(huán)節(jié)，而TGF－β1激活HSC并促進(jìn)其合成ECM則被認(rèn)為是肝纖維化發(fā)病機(jī)制的核心事件。近幾年研究發(fā)現(xiàn)，在生物進(jìn)化過程中，存在復(fù)雜而精細(xì)的調(diào)節(jié)機(jī)制參與上述TGF－β/Smad信號(hào)傳遞過程。其中，泛素蛋白酶體通路(UPP)因發(fā)現(xiàn)可以影響Smads信號(hào)的表達(dá)及調(diào)控而受到關(guān)注［3－6］。表5不同濃度硼替佐米作用后膠原表達(dá)的變?

圖2各組肝星狀細(xì)胞Smurf1、Smurf2、Smad7的表達(dá)(×400)2．3不同纖維化程度的肝組織中Smurf的表達(dá)差異在肝組織中Smurf2的表達(dá)隨著肝纖維化的進(jìn)展，表達(dá)呈下調(diào)趨勢(shì)，與肝組織免疫組化的結(jié)果一致。見表4和圖3。表4不同纖維化程度的肝組織中Smurf的表達(dá)差異樣品蛋白量吸光度值稀釋蛋白量(μL)原蛋白量(μL)150μg(μL)H2Oloading14．460．1112．2311．1413．472．53426．350．1433．1715．879．456．55434．400．112．2010．9913．652．35445．520．1292．7613．8010．875．13455．700．1322．8514．2510．535．47467．060．1553．5317．658．507．50475．760．1332．8814．3910．425．58483．920．1021．969．8115．290．7142．4不同濃度硼替佐米對(duì)HSC膠原生成的影響加入硼替佐米40ng/mL后，Smurf1、Smurf2的表達(dá)沒有顯著變化(P＞0.05)，而Smad7的低表達(dá)受到明顯抑制(P＜0.05);加入蛋白酶體抑制劑后膠原的生成受到抑制。見表5。圖3不同纖維化程度的肝組織中Smurf的表達(dá)3討論肝纖維化是由各種致病因子作用所致肝內(nèi)膠原結(jié)締組織異常增生，以肝內(nèi)彌漫性或局灶性細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)過度沉積為病理特征，可為漸變發(fā)展的漫長(zhǎng)過程，是肝硬化必經(jīng)的病理階段，也是肝癌常見的伴隨環(huán)節(jié)［2］�，F(xiàn)在已證實(shí)，HSC的激活以及HSC激活后異常表達(dá)ECM是肝纖維化發(fā)生、發(fā)展的兩個(gè)關(guān)鍵環(huán)節(jié)，而TGF－β1激活HSC并促進(jìn)其合成ECM則被認(rèn)為是肝纖維化發(fā)病機(jī)制的核心事件。近幾年研究發(fā)現(xiàn)，在生物進(jìn)化過程中，存在復(fù)雜而精細(xì)的調(diào)節(jié)機(jī)制參與上述TGF－β/Smad信號(hào)傳遞過程。其中，泛素蛋白酶體通路(UPP)因發(fā)現(xiàn)可以影響Smads信號(hào)的表達(dá)及調(diào)控而受到關(guān)注［3－6］。表5不同濃度硼替佐米作用后膠原表達(dá)的變?

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]柴胡疏肝散對(duì)肝纖維化大鼠TGF-β1/Smad信號(hào)通路的影響[J]. 尚立芝,王付,王琦,苗小玲,甘陳菲,張慧娜,王幫眾.  中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志. 2015(12)
[2]結(jié)締組織生長(zhǎng)因子在放射性肝纖維化大鼠中的動(dòng)態(tài)表達(dá)及其與肝星狀細(xì)胞活化的關(guān)系[J]. 王云蓮,艾力江·吐爾遜,艾尼瓦爾·艾木都拉,肖蕾,張?jiān)路?楊穎,吳戈,程緯,包永星.  中華放射醫(yī)學(xué)與防護(hù)雜志. 2014 (10)
[3]用于篩選和評(píng)價(jià)抑制Ⅰ型膠原α1鏈基因表達(dá)的抗肝纖維化藥物雙報(bào)告基因系統(tǒng)的構(gòu)建及其有效性鑒定[J]. 張偉,代曉朋,于虹,王魯燕,孫世惠,李軍鋒,周育森.  中華肝臟病雜志. 2014 (10)
[4]轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1疫苗對(duì)大鼠肝纖維化組織中胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白的影響[J]. 徐葉進(jìn),陳凌,陳海君,付躍娟,郭玉香,盛棋躍,陳永平.  中華傳染病雜志. 2014 (07)
[5]SnoN蛋白在肝纖維化大鼠肝組織中的表達(dá)及其意義[J]. 楊壯智,陽韜,陳永平.  醫(yī)學(xué)研究雜志. 2011(09)
[6]肝星狀細(xì)胞中的TGFβ信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路[J]. 李麗,王寶恩.  世界華人消化雜志. 2007(23)
[7]Smad通路UPP依賴性的蛋白質(zhì)降解機(jī)制[J]. 李靖,張悅,韓志芬,龐慧芳,李玉梅,劉克劍.  生命的化學(xué). 2005(05)
[8]改良法分離大鼠肝星狀細(xì)胞[J]. 趙文麗,姜慶久,吳春蓮,陶富山.  局解手術(shù)學(xué)雜志. 2004(04)



本文編號(hào)：3499427