發(fā)布時(shí)間：2021-11-12 22:35

　　目的了解乙型肝炎病毒（HBV）感染與肝細(xì)胞癌（HCC）的關(guān)系,探討乙型肝炎病毒（HBV）在肝細(xì)胞染色體上的整合規(guī)律及其在肝癌形成中的作用,了解肝細(xì)胞癌的發(fā)生機(jī)制。應(yīng)用HBV-Alu-PCR方法檢測(cè)肝細(xì)胞癌（HCC）中HBVDNA整合。方法提取乙肝相關(guān)性肝癌組織標(biāo)本中的DNA為模板,設(shè)計(jì)HBV的亞基因片段X、C、S的引物以檢測(cè)其中的HBVDNA,這個(gè)產(chǎn)物包括游離形式的和整合形式的HBVDNA;然后再設(shè)計(jì)HBV的上游序列和人類基因組Alu重復(fù)序列為引物,設(shè)計(jì)的引物中引入U(xiǎn)堿基,應(yīng)用巢式PCR的原理,利用降落PCR技術(shù),使用高度敏感的HBV-Alu-PCR方法擴(kuò)增出整合形式的HBV基因片段及其側(cè)翼的人基因組DNA片段,建立克隆整合的HBVDNA及其相鄰的細(xì)胞基因序列的PCR技術(shù)。PCR產(chǎn)物送生物公司測(cè)序,所獲結(jié)果經(jīng)美國(guó)國(guó)家生物技術(shù)信息中心（national center forbiotechnology information NCBI）BLAST及MapViewer檢索確定HBV整合在染色體上的精確位置。結(jié)果24份例HBsAg陽(yáng)性的肝癌組織中,通過(guò)HBV-PCR方法幾乎均能檢測(cè)到HBV的X... 

【文章來(lái)源】：安徽醫(yī)科大學(xué)安徽省

【文章頁(yè)數(shù)】：48 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

聚合酶鏈反應(yīng)原理及過(guò)程

(l)原理利用巢式PCR的原理，以Alu一PCR為基礎(chǔ)，應(yīng)用人類Alu序列和HBV序列的特殊引物來(lái)擴(kuò)增病毒和宿主的結(jié)合位點(diǎn)【’9]。擴(kuò)增策略采用改良的套式PcR技術(shù)，見圖3，是在套式PCR的基礎(chǔ)上加以改進(jìn)，先設(shè)定一個(gè)HBV序列的引物 HBVI和另一個(gè)細(xì)胞Alu序列的引物作為外側(cè)引物，同時(shí)又設(shè)計(jì)一個(gè)HBV:引物和Tag引物作為內(nèi)側(cè)引物，在此內(nèi)側(cè)引物的內(nèi)側(cè)還設(shè)計(jì)一個(gè)內(nèi)內(nèi)側(cè)引物HBv3和Tag作為第3對(duì)引物，進(jìn)行半套式擴(kuò)增。為了避免擴(kuò)增Ahi重復(fù)序列之間的DNA片段，引物中引入dUTPS。引物如表2。

HBv一lu-PcR產(chǎn)物測(cè)序序列HRs2743在人類染色體上的定位(Pubmed)

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]肝癌中乙型肝炎病毒整合位點(diǎn)的研究[J]. 屠紅,高海峰,馬國(guó)豪,劉毅.  中華醫(yī)學(xué)雜志. 2006(18)
[2]中國(guó)3歲以上人群乙型肝炎血清流行病學(xué)研究[J]. 梁曉峰,陳園生,王曉軍,賀雄,陳麗娟,王駿,林長(zhǎng)纓,白呼群,嚴(yán)俊,崔鋼,于競(jìng)進(jìn).  中華流行病學(xué)雜志. 2005(09)
[3]肝癌中乙型肝炎病毒整合位點(diǎn)的分離鑒定[J]. 高海峰,屠紅.  中華肝臟病雜志. 2004(09)
[4]用人肝細(xì)胞cDNA文庫(kù)制備Dig-Fas探針[J]. 唐恩潔,楊宗琪,趙明才,馮莉,任碧軒,敬保遷,李仁,眭維恥.  川北醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào). 2000(03)



本文編號(hào)：3491762