背景:大量研究發(fā)現HBV基因型/亞型與病毒感染途徑、基因突變、疾病進程和抗病毒療效具有一定相關性,且不同地域和人群的基因亞型分布有顯著差異。但在以往的研究中,HBV基因型和基因亞型分型的方法多采用PCR RFLP法,其檢測結果受到限制性內切酶的功能狀態(tài)、酶的反應條件及操作人員技術水平等影響較大,這些因素制約了PCR RFLP的檢驗效能。傳統的PCR產物直接測序法獲得的信息直觀豐富,是基因亞型分型的金標準,但其敏感性較低,通常只有104 IU/ml水平,無論應用于臨床檢測還是科學研究都很難達到理想的效果。此外,我們在分析大樣本量的序列數據時,發(fā)現采用人工判斷和統計序列差異的方法工作量大、效率低,而國外已有的HBV序列分析數據庫都以歐美流行的A型、D型、E型HBV序列為主,且很多數據庫需要付費才能使用。目的:本研究擬建立高度敏感特異的HBV序列擴增方法,檢測HBV RT全基因和前C區(qū)所有突變;建立HBV序列數據庫,借助數據庫的數據分析和匯總功能,分析2377例HBV序列的RT區(qū)耐藥突變情況、前C/BCP突變情況、CTL表位變異情況,并對基因亞型B2和C2在乙肝相關疾病進展各個階段的比例進行... 

【文章來源】：中國人民解放軍軍事科學院北京市

【文章頁數】：57 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

應用VectorNTISuite8.0軟件比對GenBank下載209條B基因型與C基因型序列(黃色

科學院碩士學位論文 對實驗條件的不斷優(yōu)化，我們建立了高效、敏感的 HBV 序列擴增方 RT 全基因和前 C 區(qū)所有突變；對 RT 耐藥突變的檢測敏感性達到了 認測序法的敏感性（≥104IU/ml）提高了 2 個數量級[14]；同時克服了圖 4 PCR 產物測序峰圖

；同時克服了高病毒載量圖 4 PCR 產物測序峰圖圖3a 電泳鑒定RT區(qū)PCR產物 (3 μl樣品)2000 bp1000 bp750 bp500 bp250 bp100 bp圖 3b 電泳鑒定前 C/BCP 區(qū)PCR 產物 (3 μl 樣品)

【參考文獻】：
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