目的：通過觀察外源性轉化生長因子β3（TGF-β3）對大鼠肝星狀細胞（HSC）中TGF-β3啟動子活性和磷酸化cAMP反應元件結合蛋白-1（CREB-1）的影響，研究TGF-β3自反饋調節(jié)信號通路中正向調節(jié)因子。方法：（1）構建并檢測TGF-β3啟動子和CRE位點突變的TGF-β3啟動子熒光素酶報告基因質粒（PGL3-TGFβ3-P和PGL3-TGFβ3-MP），并判斷脂質體轉染法對細胞形態(tài)的影響；（2）用外源性TGF-β3誘導大鼠HSC細胞，2h后提取總RNA，通過實時熒光定量PCR法測定對照組和實驗組中TGF-β3mRNA的表達情況；（3）用外源性TGF-β3誘導轉染了PGL3-TGFβ3-P的大鼠HSC細胞，于不同時間點，用熒光素酶報告基因分析法檢測TGF-β3啟動子活性；（4）將TGF-β3啟動子上的CRE結合位點基因突變，并將該突變的報告質粒與正常質粒一起轉染與大鼠HSC細胞，加/不加TGF-β3進行誘導，通過熒光素酶報告基因分析法檢測啟動子的活性；（5）用外源性TGF-β3誘導大鼠HSC細胞，于不同時間點提取核蛋白，通過電泳遷移率分析法（EMSA）檢測各時間點磷酸化CREB... 

【文章來源】：華中科技大學湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：156 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
縮略詞表
前言
    參考文獻
摘要
ABSTRACT
第一部分 CREB-1對大鼠肝星狀細胞中TGF-β3自反饋調節(jié)的影響
    前言
    材料及方法
    結果
    討論
    參考文獻
第二部分 CREB-1對大鼠肝星狀細胞中TGF-β3誘導smad7表達的影響
    前言
    材料及方法
    結果
    討論
    參考文獻
綜述
    參考文獻
附錄1 （國外學習期間完成課題的相關內容）
附錄2 （攻讀學位期間發(fā)表和擬發(fā)表論文、著書及課題）
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
[1]重組2型腺相關病毒-轉化生長因子β3對實驗性肝纖維化大鼠肝臟組織病理學和Ⅰ型膠原表達的影響[J]. 劉萍,高曉亮,余姣,錢偉,徐可樹.  中華肝臟病雜志. 2009 (06)



本文編號：3478484