目的：通過觀察外源性轉(zhuǎn)化生長因子β3（TGF-β3）對(duì)大鼠肝星狀細(xì)胞（HSC）中TGF-β3啟動(dòng)子活性和磷酸化cAMP反應(yīng)元件結(jié)合蛋白-1（CREB-1）的影響，研究TGF-β3自反饋調(diào)節(jié)信號(hào)通路中正向調(diào)節(jié)因子。方法：（1）構(gòu)建并檢測(cè)TGF-β3啟動(dòng)子和CRE位點(diǎn)突變的TGF-β3啟動(dòng)子熒光素酶報(bào)告基因質(zhì)粒（PGL3-TGFβ3-P和PGL3-TGFβ3-MP），并判斷脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法對(duì)細(xì)胞形態(tài)的影響；（2）用外源性TGF-β3誘導(dǎo)大鼠HSC細(xì)胞，2h后提取總RNA，通過實(shí)時(shí)熒光定量PCR法測(cè)定對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組中TGF-β3mRNA的表達(dá)情況；（3）用外源性TGF-β3誘導(dǎo)轉(zhuǎn)染了PGL3-TGFβ3-P的大鼠HSC細(xì)胞，于不同時(shí)間點(diǎn)，用熒光素酶報(bào)告基因分析法檢測(cè)TGF-β3啟動(dòng)子活性；（4）將TGF-β3啟動(dòng)子上的CRE結(jié)合位點(diǎn)基因突變，并將該突變的報(bào)告質(zhì)粒與正常質(zhì)粒一起轉(zhuǎn)染與大鼠HSC細(xì)胞，加/不加TGF-β3進(jìn)行誘導(dǎo)，通過熒光素酶報(bào)告基因分析法檢測(cè)啟動(dòng)子的活性；（5）用外源性TGF-β3誘導(dǎo)大鼠HSC細(xì)胞，于不同時(shí)間點(diǎn)提取核蛋白，通過電泳遷移率分析法（EMSA）檢測(cè)各時(shí)間點(diǎn)磷酸化CREB... 

【文章來源】：華中科技大學(xué)湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：156 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
縮略詞表
前言
    參考文獻(xiàn)
摘要
ABSTRACT
第一部分 CREB-1對(duì)大鼠肝星狀細(xì)胞中TGF-β3自反饋調(diào)節(jié)的影響
    前言
    材料及方法
    結(jié)果
    討論
    參考文獻(xiàn)
第二部分 CREB-1對(duì)大鼠肝星狀細(xì)胞中TGF-β3誘導(dǎo)smad7表達(dá)的影響
    前言
    材料及方法
    結(jié)果
    討論
    參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
附錄1 （國外學(xué)習(xí)期間完成課題的相關(guān)內(nèi)容）
附錄2 （攻讀學(xué)位期間發(fā)表和擬發(fā)表論文、著書及課題）
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]重組2型腺相關(guān)病毒-轉(zhuǎn)化生長因子β3對(duì)實(shí)驗(yàn)性肝纖維化大鼠肝臟組織病理學(xué)和Ⅰ型膠原表達(dá)的影響[J]. 劉萍,高曉亮,余姣,錢偉,徐可樹.  中華肝臟病雜志. 2009 (06)



本文編號(hào)：3478484