背景:炎癥性腸�。↖nflammatory bowel disease,IBD）是一類腸道慢性炎癥性疾病,其病因和發(fā)病機(jī)制尚不明確,主要包括潰瘍性結(jié)腸炎（ulcerative colitis,UC）和克羅恩�。–rohn’s disease,CD）。在炎癥性腸病的患者中,CD中主要是以Th1型免疫反應(yīng)為主,而在UC中則主要是以Th2型免疫反應(yīng)為主。在IBD的治療上,傳統(tǒng)治療藥物由于長(zhǎng)期使用造成患者不良反應(yīng)較多、復(fù)發(fā)率較高,同時(shí)對(duì)重度患者療效不佳。本課題組前期通過TNBS誘導(dǎo)的Th1型反應(yīng)為主的小鼠實(shí)驗(yàn)性結(jié)腸炎,在通過日本血吸蟲蟲卵可溶性抗原,誘導(dǎo)產(chǎn)生Th2型為主的免疫應(yīng)答,下調(diào)Th1型炎癥反應(yīng),抑制小鼠結(jié)腸炎癥,達(dá)到一定的保護(hù)作用。本實(shí)驗(yàn)主要在課題組前期的研究基礎(chǔ)上,通過研究弓形蟲（Toxoplasma gondii,Tg）相關(guān)毒力效應(yīng)分子ROP16_Ⅰ/Ⅲ(ToxoROP16_Ⅰ/Ⅲ)通過激活旁路激活途徑的巨噬細(xì)胞向M2（alternatively activated macrophages）型細(xì)胞極化,通過LPS（脂多糖）激活經(jīng)典途徑的巨噬細(xì)... 

【文章來源】：安徽醫(yī)科大學(xué)安徽省

【文章頁數(shù)】：58 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

LPS誘導(dǎo)RAW264.7細(xì)胞時(shí)間點(diǎn)的選擇

圖 2 LPS 誘導(dǎo) RAW264.7 細(xì)胞時(shí)間點(diǎn)的選擇Fig 2. Selection of optimal time points for LPS stimulation of macrophagesTo explore the best time point for 1μg/ml of LPS stimulated of Mφ cells. Seeded in 6-well platewith 2×106cells per well to detected of iNOS expression within 24 hours, then we selected gradient of time. In order to select the best time point for cells and supernatant collection anddetection. After stimulated 6 hours iNOS start expression.3.3 LPS 誘導(dǎo) RAW264.7 向 M1 炎性細(xì)胞極化的結(jié)果3.3.1 qRT-PCR 法定量 RAW264.7 細(xì)胞向 M1 型炎性細(xì)胞極化的結(jié)果用熒光定量 PCR 法（qRT-PCR 法）定量經(jīng)過經(jīng)典激活途徑表達(dá)具有 M1 型的炎性巨噬細(xì)胞產(chǎn)生的促炎因子如 IL-6、IL-1β、TNF-α、iNOS，在 M1 型炎癥組中IL-6、IL-1β、TNF-α、iNOS 表達(dá)明顯上調(diào)，差異具有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,且 p<0.001。見圖 3。

Fig 3. The expression mRNA of IL-6, IL-1 β, TNF-α and iNOS in M1 inflammatory cells byLPS induced RAW264.7.a: mRAN expression of IL-6 in each group; b: mRAN expression of IL-1 β in each group; c: mRANexpression of TNF- α in each group; d: mRAN expression of iNOS in each group; comparison withnormal group: *** p < 0.001.3.3.2 ELISA 法檢測(cè) LPS 誘導(dǎo) RAW264.7 細(xì)胞向 M1 型炎性細(xì)胞極化的結(jié)果用 ELISA 法檢測(cè)細(xì)胞上清液中 M1 型炎性細(xì)胞極化過程中分泌的 IL-6、IL-1β和 TNF-α的情況。上清液同前被分成五組組進(jìn)行比較，經(jīng)典途徑極化的 M1 型細(xì)胞的上清中較正常 RAW264.7 細(xì)胞組，分泌 IL-6 (p<0.001)、IL-1β (p<0.001)和 TNF-α(p<0.001)明顯增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。其結(jié)果與在 mRAN 的表達(dá)的水平上是相互一致的。在正常組和空載慢病毒組，以及慢病毒組未見明顯升高。見圖 4。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Immunopathology of inflammatory bowel disease[J]. Kori L Wallace,Li-Bo Zheng,Yoshitake Kanazawa,David Q Shih.  World Journal of Gastroenterology. 2014(01)
[2]Innate and adaptive immunity in inflammatory bowel disease[J]. Britta Siegmund,Martin Zeitz.  World Journal of Gastroenterology. 2011(27)



本文編號(hào)：3466549