目的:觀察瘦素對脂變肝細胞甘油三酯含量、脂滴形成和PPARα及其目標基因CPT-I、LPL mRNA表達的影響,初步探討瘦素對肝細胞脂質變性的作用及其機制,為早期臨床防治NAFL提供理論基礎。方法:以離體人肝L-02細胞株為研究對象。用含10%醫(yī)用脂肪乳注射液和10%胎牛血清的RPMI-1640的完全培養(yǎng)基孵育人肝L-02細胞24小時,制備肝細胞脂肪變性模型。實驗分為正常肝細胞組、模型組,即脂變肝細胞組、不同濃度瘦素組（使瘦素終濃度分別為10-8mol/L、10-7mol/L、10-6mol/L）、陽性對照組（即脂變肝細胞加入吉非羅齊,使其終濃度為100mg/L）;孵育24小時后,油紅O染色觀察細胞形態(tài)和細胞內脂滴的形成情況,高效液相色譜法檢測細胞內甘油三酯的含量,半定量RT-PCR法檢測PPARα及其目標基因CPT-I、LPL mRNA水平的表達。根據(jù)瘦素改善細胞內甘油三酯的含量情況,作出量效關系,然后以瘦素10-7mol/L濃度分別孵育模型組細胞12h,24h,48h,使用上述觀察方法,作出時效關系。實驗數(shù)據(jù)以x±s表示,用SPSS13.0統(tǒng)計軟件對數(shù)據(jù)進行分析,以P<0.0... 

【文章來源】：南華大學湖南省

【文章頁數(shù)】：45 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

正常組(油紅O×400)

實 驗 結 果1 肝細胞脂肪變性模型的建立：正常組肝細胞油紅 O 染色后，光鏡下觀察：肝細胞形態(tài)正常，為多邊胞核藍染，胞膜界限清楚，胞漿內未見脂滴。模型組肝細胞系用含體積分數(shù)醫(yī)用脂肪乳注射液和 10%胎牛血清的 RPMI-1640 完全培養(yǎng)基孵育人肝 L胞 24 小時，油紅 O 染色顯示胞漿內見大量紅色的小泡性脂滴，肝細胞腫細胞核位于細胞中央，符合肝細胞小泡性脂肪變性特征(見圖 1，2)。高效測定細胞內甘油三酯含量，模型組與正常組細胞內甘油三酯含量分1.612±0.104mmol/g 蛋白， 0.417±0.045mmol/g 蛋白，差別有統(tǒng)計學(p<0.01)(見圖 3)。

2 不同濃度和不同時間瘦素處理后脂滴形態(tài)數(shù)量的變化按表 1 方案處理細胞后，油紅 O 染色結果發(fā)現(xiàn)：正常組細胞形態(tài)正常，胞膜界限清楚，無明顯脂滴形成；模型組肝細胞腫脹，細胞漿內可見大量紅色的小泡性脂滴，瘦素(10-8mol/ L，10-7mol/ L，10-6mol/L)處理組及陽性對照組細胞漿內僅少量紅色的小泡性脂滴(見圖 1，2，4~7)，隨著瘦素濃度的遞增，細胞內脂滴數(shù)量逐漸減少。

【參考文獻】：
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本文編號：3463331