丙型肝炎病毒是引起慢性肝炎、肝硬化及肝癌的主要病原之一,每年約有250,000-350,000人死于HCV相關(guān)終末期肝病、肝硬化及肝癌。HCV感染對(duì)患者的健康和生命危害極大,已成為嚴(yán)重的社會(huì)和公共衛(wèi)生問題,但針對(duì)HCV感染的治療手段有限,目前唯一的治療手段是干擾素加利巴韋林,而且不能用于失代償期的患者。迄今為止,還沒有可預(yù)防HCV感染的疫苗。不能更深入的揭示HCV的發(fā)病機(jī)制是造成預(yù)防與治療的相對(duì)滯后的主要原因之一,因此,進(jìn)一步探尋HCV致病的分子生物學(xué)機(jī)制是目前研究的熱點(diǎn)問題。丙型肝炎病毒核心蛋白結(jié)合蛋白6（HCBP6）是本實(shí)驗(yàn)室前期應(yīng)用酵母雙雜交技術(shù)從肝細(xì)胞cDNA文庫中篩選得到的一種與HCV核心蛋白結(jié)合的蛋白。且本實(shí)驗(yàn)室前期發(fā)現(xiàn), HCBP6蛋白能夠上調(diào)和下調(diào)一系列不同基因的表達(dá)水平,這些差異表達(dá)的基因與細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、增生、分化及生長調(diào)節(jié)密切相關(guān)。因此有必要對(duì)HCBP6進(jìn)一步深入研究。真核生物的基因表達(dá)及調(diào)節(jié)作用是多水平的調(diào)節(jié),其中主要是以轉(zhuǎn)錄水平的調(diào)節(jié)研究較為清楚。轉(zhuǎn)錄調(diào)控的本質(zhì)就是蛋白質(zhì)與DNA或者蛋白質(zhì)與蛋白質(zhì)之間的相互作用。丙型肝炎病毒屬于RNA病毒,HCV生活周期中并不存... 

【文章來源】：山西醫(yī)科大學(xué)山西省

【文章頁數(shù)】：50 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【圖文】：

圖1一7

在相關(guān)生物網(wǎng)站預(yù)測(cè)可知，在啟動(dòng)子HCBP6一1及HCBP6一2序列之間的差異序列上存在轉(zhuǎn)錄因子SPI的結(jié)合位點(diǎn)，其序列為GGGcGG，在本部分實(shí)驗(yàn)中經(jīng)EMsA實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證可與核蛋白特異性結(jié)合，證明該位點(diǎn)確實(shí)為轉(zhuǎn)錄因子sPI的結(jié)合位點(diǎn)。(見圖2一2)附圖Unabled一 EBNADNA 2pl EBNAExtractl拌 1lplBiotin一 EBNAControlDNA 2p12p12協(xié)l圖2一1試劑盒陽性對(duì)照的EMSA分析在非變性凝膠中，探針的泳動(dòng)速度比蛋白快，所以探針與蛋白可通過電泳分開，探針在膠的卜方而蛋自在上方。第一泳道，只加有生物素標(biāo)記的探針，所以只有探針帶。第二泳道，同時(shí)加有核蛋自與標(biāo)記探針，可同時(shí)看到探針帶和蛋自帶，說明部分探針與核蛋自結(jié)合。第三泳道，同時(shí)加野生探針，100倍濃度未標(biāo)記的冷探針，及核蛋自，結(jié)果蛋自條帶消失，說明大劑量未標(biāo)記的冷探針可將野生探針從核蛋白上競(jìng)爭(zhēng)一卜來。

里子生探針++十++一抗SPI抗體圖2一 2SPI轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn)的EMSA分析在電泳過程中，探針移動(dòng)速率快在下方，蛋白移動(dòng)較慢在上方。在第1泳道，只有野生探針。第二泳道，加入核蛋自與突變的探針，只有微弱的蛋自條帶顯示。第二泳道，探針與核蛋白均可顯現(xiàn)，說明野生探針可與核蛋白結(jié)合，從而使蛋自顯像，而未結(jié)合的游離探針出現(xiàn)在探針的位置。第四泳道，同時(shí)加入核蛋白，野生探針及100倍濃度的冷探針，只有微弱的蛋白條帶顯示，說明大劑量的冷探針可將野生探針從核蛋白上競(jìng)爭(zhēng)卜來。第五泳道，同時(shí)加入野生探針，核蛋白，以及高濃度的突變探針

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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