為探索在肝纖維化的干細(xì)胞治療中,基底力學(xué)微環(huán)境和細(xì)胞間相互作用對(duì)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（Bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs）分化,以及肝內(nèi)細(xì)胞功能和表型的影響。本研究通過(guò)制備不同彈性模量（楊氏模量分別為:4.5±0.47 kPa、19±3.51 kPa、37±2.09 kPa）的聚乙烯醇水凝膠基底來(lái)構(gòu)建不同的基底力學(xué)環(huán)境,采用非接觸性細(xì)胞共培養(yǎng)的方法,將BMSCs-肝細(xì)胞、BMSCs-肝星狀細(xì)胞（Hepatic stellate cells,HSCs）共培養(yǎng)于不同彈性模量的PVA水凝膠基底上。利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)、流式細(xì)胞術(shù)等實(shí)驗(yàn)手段,研究了力學(xué)環(huán)境對(duì)BMSCs、肝細(xì)胞和HSCs的功能影響;研究了不同基底力學(xué)微環(huán)境中BMSCs對(duì)HSCs的活化和肝細(xì)胞的增殖影響;以及不同基底力學(xué)微環(huán)境中HSCs和肝細(xì)胞分別對(duì)BMSCs分化的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,BMSCs、肝細(xì)胞和HSCs在我們制備的三種彈性模量的聚乙烯醇水凝膠基底上都能夠良好的生長(zhǎng)。隨著基底彈性模量的增加,單獨(dú)培養(yǎng)的BMSCs和HSCs的α-平滑肌肌動(dòng)蛋白（α-Smooth muscle a... 

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【文章頁(yè)數(shù)】：79 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

自行設(shè)計(jì)的拉伸裝置示意圖

冷卻到室溫的 8%的 PVA 溶液。呈現(xiàn)出透明稠狀。圖2.2d 是按一定配比加入鹽酸和戊二醛化學(xué)交聯(lián)后的 PVA 水凝膠。水凝膠厚度均勻，大約 2 mm。圖 2.2e 是經(jīng)過(guò) Sulfo-SANPAH 光敏交聯(lián)后的 PVA 水凝膠。水凝膠本身是無(wú)色的，經(jīng)過(guò) Sulfo-SANPAH 光敏交聯(lián)后，呈現(xiàn)出淡淡的紅色。

圖 2.3 聚乙烯醇彈性模量測(cè)定值[60]（a）軟、中等和硬的 PVA 水凝膠 SEM 圖；（b）不同濃度交聯(lián)劑的 PVA 水凝膠的彈性模量；（c）通過(guò) SEM 圖像統(tǒng)計(jì)的軟、中等和硬的水凝膠的孔徑大��；（d）水凝膠的形態(tài)。Figure 2.3 Determination of elastic modulus of polyvinyl alcohol(a) SEM images of soft, moderate and stiff PVA hydrogels. (b) Elastic modulus of PVA hydrogelscontain different concentration of crosslinkers. (c) Pore size of dried soft, moderate and stiffhydroges substrates statisticed by SEM images. (d) Morphology of hydrogels prepared.根據(jù)研究報(bào)道[76,77]，通過(guò)瞬時(shí)彈性成像評(píng)估肝臟的硬度顯示：正常肝臟的硬度，纖維化肝臟的早期和晚期，分別為 1.5-4.5 kPa，4.1-12.9 kPa 和 16.3-48 kPa，也有研究表明[74]，人體正常的肝彈性模量值在 2.5-7 kPa 之間，細(xì)胞較適宜的生存環(huán)境為 2.5-5 kPa，所以我們把正常肝的彈性模量設(shè)定為 4.5 kPa，選取 19 kPa 為纖維化形成后的彈性模量，選取 37 kPa 為纖維化后期或肝硬化的彈性模量。選定的三種彈性模量水凝膠的制作配比如表 2.1 所示。

【參考文獻(xiàn)】：
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