目的:HBV感染呈世界性流行,每年約有100萬(wàn)人死于慢性HBV感染所致的肝衰竭、肝硬化和原發(fā)性肝細(xì)胞癌（HCC）。目前研究顯示HBeAg非HBV病毒結(jié)構(gòu)蛋白,也不參與病毒復(fù)制,但其作為重要的調(diào)節(jié)免疫的功能蛋白在HBV慢性感染過(guò)程中作用越來(lái)越受到重視。Toll樣受體（toll-like receptors,TLR）為模式識(shí)別受體（pattern recognition receptors,PRR）的重要成員,是機(jī)體免疫系統(tǒng)識(shí)別病原體,起動(dòng)固有免疫和調(diào)節(jié)適應(yīng)性免疫的重要分子。程序死亡因子（PD-1）/ PD-L1是免疫球蛋白超家族協(xié)同刺激分子的重要成員,參與機(jī)體免疫調(diào)節(jié)過(guò)程。本文擬通過(guò)觀察HBeAg對(duì)人單核細(xì)胞株（THP-1）及人外周血單個(gè)核細(xì)胞（PBMC）細(xì)胞表面TLR2、TLR4、PD-1和PD-L1的受體和mRNA表達(dá)的影響,以及對(duì)細(xì)胞因子IL-2、4、6、10、17以及TNF-α和IFN-γ表達(dá)的影響,揭示HBeAg在HBV感染所致免疫耐受中的作用和地位,為闡明HBeAg的免疫調(diào)節(jié)機(jī)制以及HBV感染慢性化的免疫機(jī)制提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法:1.應(yīng)用本實(shí)驗(yàn)室已經(jīng)構(gòu)建的pJW4303/HBe... 

【文章來(lái)源】：南京醫(yī)科大學(xué)江蘇省

【文章頁(yè)數(shù)】：56 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

質(zhì)粒JW4303/HBe酶切鑒定結(jié)果

24圖 2：質(zhì)粒 pJW4303/HBe 測(cè)序結(jié)果1.2.人抗 HBe 血清阻斷 HBeAg 的工作濃度確定收獲 pJW4303/HBe 轉(zhuǎn)染 293T 細(xì)胞上清，雅培檢測(cè) HBeAg，依照本實(shí)驗(yàn)既往確定的 HBeAg 66.71 S/CO 做為工作濃度；確定人抗 HBe 血清工作濃度采倍比稀釋人抗 HBe 血清（1:5~1:1280）阻斷 HBeAg 后，ELISA 檢測(cè) HBeAgHBeAb，結(jié)果顯示阻斷劑人抗 HBe 血清稀釋比例≤ 1:80 時(shí) HBeAg 均能被阻（圖 3）。

圖 3：人抗 HBe 血清阻斷 HBeAg 工作濃度選擇A 圖為人抗 HBe 血清阻斷 HBeAg 后 ELISA 檢測(cè) HBeAb，橫坐標(biāo)為血清稀釋度，縱坐標(biāo)為OD值, cutoff值為0.92，陽(yáng)性為＜cutoff值。B圖人抗HBe血清阻斷HBeAg后ELISA檢測(cè) HBeAg，橫坐標(biāo)為血清稀釋度，縱坐標(biāo)為 OD 值，cutoff 值為 0.15，陽(yáng)性為＞cutof值。圖示 ●健康人血清+HBeAg：健康人抗 HBe 陰性血清阻斷 HBeAg 上清；▲ 人抗HBe 血清+HBeAg：人抗 HBe 血清阻斷 HBeAg 上清。2. HBeAg 對(duì)人 THP-1 細(xì)胞株的影響：2.1 HBeAg 對(duì)人 THP-1 細(xì)胞表面 TLR2、TLR4、PD-1 及 PD-L1 表達(dá)的影響加入 HBeAg 孵育后，CD14+的 THP-1 細(xì)胞表達(dá) TLR2 （3.10%）和 TLR4（7.55%）與對(duì)照組相比 TLR2（6.31%）和 TLR4（17.84%）均下降（t=-1.964，p<0.05），但 PD-1、PD-L1 變化無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，應(yīng)用人抗 HBe 血清阻斷 HBeAg后 TLR2、TLR4 表達(dá)的沒(méi)有明顯上調(diào)（圖 4）。由此顯示 HBeAg 下調(diào) CD14+的

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]乙型肝炎e抗原對(duì)外周血單核細(xì)胞Toll樣受體2表達(dá)的影響[J]. 韓亞萍,李軍,萬(wàn)玉峰,孔練花,蔡潔,董莉,劉源,陳念,黃祖瑚.  中華肝臟病雜志. 2008 (10)
[2]慢性乙型肝炎患者單核細(xì)胞來(lái)源樹(shù)突狀細(xì)胞Toll樣受體7的表達(dá)低下[J]. 李軍,韓亞萍,孔練花,劉源,陳念,董莉,黃祖瑚.  南京醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版). 2007(09)



本文編號(hào)：3408251