發(fā)布時(shí)間：2021-08-29 11:13

　　肝硬化是目前威脅人類健康的最重要疾病之一,發(fā)病率居高不下,而且隨著各種因素的影響其發(fā)病率依然呈上升趨勢。肝纖維化是多數(shù)慢性肝病發(fā)展的共同病理過程,其發(fā)病機(jī)理不十分清楚,也缺少有效的治療方法。大量的研究表明肝星狀細(xì)胞（Hepatic stellate cell, HSC）的激活在肝纖維化形成過程中起關(guān)鍵性的作用,抑制肝臟的維生素A酯水解能有效的抑制HSC的激活被認(rèn)為是治療肝纖維化的靶點(diǎn)。目前還沒有確定在生理狀態(tài)下肝臟維生素A酯水解的酶系。胰脂酶基因胰脂肪酶相關(guān)蛋白2 （murine Pancreatic lipase-related protein 2, mPlrp2）和胰輔酯酶（murine Procolipase, mClps）被發(fā)現(xiàn)可以通過環(huán)境光誘導(dǎo)在肝臟條件性表達(dá)。在此基礎(chǔ)上本研究較為系統(tǒng)地研究了光信號調(diào)控的mPlrp2和mClps的條件性表達(dá)的分子機(jī)制,并證實(shí)了它們在肝維生素A代謝和肝纖維化進(jìn)程中的作用。本研究首先分析了不同光照條件下小鼠血清中維生素A及其衍生物含量的變化。高效液相色譜（High-performance liquid chromatography, HPLC）結(jié)... 

【文章來源】：南京理工大學(xué)江蘇省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：182 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
注釋表
目錄
1 緒論
    1.1 環(huán)境光對哺乳動物的生理和行為的影響
        1.1.1 環(huán)境光對哺乳動物晝夜節(jié)律和睡眠的影響
        1.1.2 環(huán)境光對大腦功能的影響
        1.1.3 環(huán)境光對動物基因表達(dá)的影響
        1.1.4 總結(jié)
    1.2 維生素A在動物體內(nèi)的吸收、代謝和功能
        1.2.1 維生素A的體內(nèi)吸收
        1.2.2 肝臟中維生素A的吸收
        1.2.3 血液中維生素A的運(yùn)輸
        1.2.4 胞內(nèi)視黃醛和視黃酸的形成
        1.2.5 維生素A作用機(jī)理
    1.3 脂肪代謝基因mClps
        1.3.1 脂肪代謝基因mClps表達(dá)的器官特異性
        1.3.2 脂肪代謝基因mClps對環(huán)境光的反應(yīng)
    1.4 肝纖維化的研究進(jìn)展
        1.4.1 肝細(xì)胞機(jī)制
        1.4.2 參與肝纖維化的細(xì)胞因子
    1.5 S-腺苷甲硫氨酸在肝臟修復(fù)和損傷中的作用
        1.5.1 SAMe的合成和降解
        1.5.2 SAMe在肝臟損傷中的作用
        1.5.3 SAMe能調(diào)節(jié)肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞的生長
        1.5.4 SAMe對肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞凋亡的調(diào)控
        1.5.5 SAMe對肝臟疾病的治療作用
        1.5.6 MTA在SAMe作用機(jī)理中的作用
    1.6 維生素A的代謝和肝臟纖維化
        1.6.1 肝纖維化形成過程中體內(nèi)類視黃醇的變化
        1.6.2 視黃酸對肝纖維化形成影響
        1.6.3 CRBP1與肝纖維化
        1.6.4 LRAT與肝纖維化
    1.7 肝纖維化過程中的RNA特異性干擾
        1.7.1 水動力轉(zhuǎn)染
        1.7.2 局部注射
    1.8 本課題提出的意義和主要研究方向
    1.9 參考文獻(xiàn)
2 環(huán)境光通過影響血液中全反式視黃酸含量調(diào)控肝臟mPlrp2、mClps表達(dá)和肝內(nèi)脂肪代謝
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)儀器
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)動物
        2.1.3 實(shí)驗(yàn)試劑
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 血清中ATRA含量的測定
        2.2.2 血清中視黃醇含量分析
        2.2.3 肝臟中ATRA含量分析
        2.2.4 肝臟中ATR含量分析
        2.2.5 肝臟中維生素A酯含量分析
        2.2.6 基因表達(dá)分析
        2.2.7 SDS PAGE蛋白電泳
        2.2.8 Western Blot
        2.2.9 血清中腺苷-5'-單磷酸含量的測定
        2.2.10 血清中甘油三酯、膽固醇含量的測定
        2.2.11 肝組織切片的制作和染色
        2.2.12 RNA印跡(Northern Blot)
    2.3 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)
        2.3.1 不同光照條件下血清中ATRA含量的分析
        2.3.2 環(huán)境光對肝臟脂肪代謝基因表達(dá)影響的分析
        2.3.3 ATRA對小鼠肝臟中mClps、mPlrp2表達(dá)影響的分析
        2.3.4 ATRA對血清中5'-AMP含量影響
        2.3.5 腺苷受體對肝臟中mClps和mPlrp2表達(dá)的影響
        2.3.6 LD和DD條件下小鼠體內(nèi)維生素A含量變化的分析
        2.3.7 LD和DD條件下小鼠體內(nèi)脂肪代謝變化的分析
        2.3.8 持續(xù)黑暗對小鼠肝內(nèi)脂肪代謝的變化
    2.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        2.4.1 不同光照條件下血清中ATRA含量的變化
        2.4.2 環(huán)境光對肝臟脂肪代謝基因表達(dá)的影響
        2.4.3 ATRA對小鼠肝臟中mClps、mPlrp2表達(dá)影響的分析
        2.4.4 ATRA對胞外-5'核苷酸酶的表達(dá)和血清中5'-AMP含量影響
        2.4.5 腺苷受體對肝臟中mClps和mPlrp2表達(dá)的影響
        2.4.6 LD和DD條件下小鼠體內(nèi)維生素A含量變化的分析
        2.4.7 LD和DD條件下小鼠體內(nèi)脂肪代謝變化
        2.4.8 持續(xù)黑暗對小鼠肝內(nèi)脂肪代謝的影響
    2.5 結(jié)果討論
    2.6 參考文獻(xiàn)
3 mClps、mPlrp2參與肝臟中維生素A酯水解
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.1 實(shí)驗(yàn)儀器
        3.1.2 實(shí)驗(yàn)動物
        3.1.3 實(shí)驗(yàn)試劑
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 肝星狀細(xì)胞系HSC-T6細(xì)胞中RE含量分析
        3.2.2 血清中ATR含量分析
        3.2.3 基因表達(dá)分析
        3.2.4 HSC-T6細(xì)胞轉(zhuǎn)染方案
    3.3 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)
        3.3.1 光波長和光照強(qiáng)度對肝臟中mPlrp2和mClps表達(dá)的影響
        3.3.2 喂飼VA-free食物對肝中mPlrp2和mClps表達(dá)的影響
        3.3.3 5'-甲硫腺苷對肝中mPlrp2和mClps的表達(dá)和血清中視黃醇含量的影響
        3.3.4 肝星狀細(xì)胞HSC-T6中mPlrp2和mClps的表達(dá)情況
        3.3.5 5'-甲硫腺苷對HSC-T6中維生素A酯水解的影響
        3.3.6 SiRNA-Plrp2對HSC-T6中維生素A酯水解的影響
    3.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.4.1 弱光照激活肝臟中mPlrp2和mClps的表達(dá)
        3.4.2 喂飼VA-free食物激活肝中mPlrp2和mClps的表達(dá)
        3.4.3 甲硫腺苷抑制肝中mPlrp2和mClps的表達(dá),并明顯降低血清中視黃醇含量
        3.4.4 肝星狀細(xì)胞HSC-T6特異性表達(dá)mPlrp2和mClps
        3.4.5 5’-甲硫腺苷抑制HSC-T6中維生素A酯的水解
        3.4.6 SiRNA-Plrp2質(zhì)粒的構(gòu)建和結(jié)構(gòu)
        3.4.7 SiRNA-Plrp2抑制HSC-T6中維生素A酯的水解
    3.5 結(jié)果討論
    3.6 參考文獻(xiàn)
4 S-腺苷蛋氨酸和S-腺苷高半胱氨酸的比例調(diào)控mPlrp2和mClps組織特異性表達(dá)
    4.1 實(shí)驗(yàn)材料
        4.1.1 實(shí)驗(yàn)儀器
        4.1.2 實(shí)驗(yàn)動物
        4.1.3 實(shí)驗(yàn)試劑
    4.2 實(shí)驗(yàn)方法
        4.2.1 組織中AdoMet和AhoHcy含量的測定
        4.2.2 組織中ATP、ADP、AMP含量的測定
        4.2.3 染色體免疫共沉淀(Chromatin immunoprecipitation,ChIP)
    4.3 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)
        4.3.1 胰腺中mPlrp2和mClps的特異性表達(dá)與S-腺苷蛋氨酸和S-腺苷高半胱氨酸比例的關(guān)系分析
        4.3.2 光照對肝中S-腺苷蛋氨酸和S-腺苷高半胱氨酸的比例的影響
        4.3.3 分別注射ATRA和5'-AMP對肝中S-腺苷蛋氨酸和S-腺苷高半胱氨酸的比例的影響
        4.3.4 喂飼VA-free食物對小鼠肝臟中mPlrp2和mClps的啟動子區(qū)域結(jié)合組蛋白H3K4三甲基化的影響
        4.3.5 抑制甲基化酶活對肝臟和星狀細(xì)胞中mPlrp2和mClps表達(dá)的影響
    4.4 結(jié)果討論
        4.4.1 胰腺中mPlrp2和mClps的特異性表達(dá)與S-腺苷蛋氨酸和S-腺苷高半胱氨酸的比例有關(guān)
        4.4.2 持續(xù)黑暗和弱光照提升肝中S-腺苷蛋氨酸和S-腺苷高半胱氨酸的比例
        4.4.3 分別注射ATRA和5'-AMP改變肝中S-腺苷蛋氨酸和S-腺苷高半胱氨酸的比例
        4.4.4 喂飼VA-free食物激活肝中肝中mPlrp2和mClps的表達(dá)與增加mPlrp2和mClps的啟動子區(qū)域結(jié)合組蛋白H3K4三甲基化有關(guān)
        4.4.5 甲基化酶抑制劑抑制mPlrp2和mClps的表達(dá)
    4.5 結(jié)果討論
    4.6 參考文獻(xiàn)
5 S-腺苷蛋氨酸和SiRNA抑制肝臟mClps、mPlrp2的表達(dá)并改善肝纖維化
    5.1 實(shí)驗(yàn)材料
        5.1.1 實(shí)驗(yàn)儀器
        5.1.2 實(shí)驗(yàn)動物
        5.1.3 實(shí)驗(yàn)試劑
    5.2 實(shí)驗(yàn)方法
        5.2.1 血清中ATR含量分析
        5.2.2 免疫組化實(shí)驗(yàn)方案
        5.2.3 基因表達(dá)分析
        5.2.4 Masson's trichrome染色
    5.3 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)
        5.3.1 肝纖維化對肝臟mPlrp2和mClps的表達(dá)的影響
        5.3.2 mPlrp2和mClps的表達(dá)與肝星狀細(xì)胞的激活的關(guān)系
        5.3.3 SiRNAplrp2對BDL導(dǎo)致的肝纖維化的治療作用
        5.3.4 SAM對肝內(nèi)mPlrp2和mClps表達(dá)和體內(nèi)、外維生素A酯水解的影響
        5.3.5 BDL小鼠肝內(nèi)mPlrp2啟動子區(qū)域結(jié)合組蛋白H3K4三甲基化增加誘導(dǎo)mPlrp2表達(dá)
    5.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        5.4.1 肝纖維化激活肝臟mPlrp2和mClps的表達(dá)
        5.4.2 mPlrp2和mClps的表達(dá)隨著星狀細(xì)胞的激活而升高
        5.4.3 ShRNAplrp2改善BDL導(dǎo)致的肝纖維化
        5.4.4 SAM抑制肝內(nèi)mPlrp2表達(dá)并減少體內(nèi)、外維生素A酯水解
        5.4.5 BDL小鼠肝內(nèi)mPlrp2啟動子區(qū)域結(jié)合組蛋白H3K4三甲基化增加誘導(dǎo)mPlrp2表達(dá)
    5.5 結(jié)果討論
    5.6 參考文獻(xiàn)
全文總結(jié)
論文創(chuàng)新點(diǎn)
致謝
附錄 攻讀博士學(xué)位期間發(fā)表的論文和出版著作情況



本文編號：3370547