背景及目的炎癥性腸�。↖nflammatory Bowel Disease,IBD）是一類病因不明的累及腸道的慢性非特異性疾病,包括克羅恩�。–rohns disease,CD）和潰瘍性結(jié)腸炎（ulcerative colitis,UC）。近年來,隨著全基因組關(guān)聯(lián)分析的廣泛應(yīng)用,多個(gè)自噬相關(guān)基因及其單核苷酸多態(tài)性已被證明與IBD相關(guān)。自噬是真核生物中一種高度保守的進(jìn)化過程,它通過降解吸收受損細(xì)胞器、無用蛋白質(zhì)和衰老核酸來維持細(xì)胞內(nèi)的動(dòng)態(tài)平衡。研究發(fā)現(xiàn)在IBD患者中腸上皮細(xì)胞缺乏自噬,破壞了腸上皮細(xì)胞正常的生理平衡。在富氧的腸道固有層和缺氧的腸腔之間存在“生理性缺氧”區(qū)域,位于此區(qū)域的專性厭氧細(xì)菌通過代謝產(chǎn)物不斷增加氧氣消耗從而維持腸道的“生理性缺氧”環(huán)境。微循環(huán)缺氧是IBD的重要特征,IBD條件下微血管閉塞以及血栓形成,進(jìn)一步增加了腸上皮細(xì)胞的氧氣消耗。缺氧誘導(dǎo)因子-1α（Hypoxia-inducible factor 1α,HIF-1α）是胞內(nèi)低氧條件下可對多種基因進(jìn)行調(diào)控的轉(zhuǎn)錄因子,可以誘導(dǎo)新生血管形成、促進(jìn)各種相關(guān)基因的表達(dá),使細(xì)胞適應(yīng)低氧環(huán)境。更有趣的是,腸道的“生理性缺氧”... 

【文章來源】：中國人民解放軍陸軍軍醫(yī)大學(xué)重慶市

【文章頁數(shù)】：53 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

小鼠體重的變化；b.小鼠結(jié)腸切片HE染色結(jié)果（200×）；c.小鼠結(jié)腸長度的變化；d.DAI指數(shù)變化；e.炎癥分?jǐn)?shù)變化

陸軍軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文23圖2各組小鼠炎癥因子變化*：P<0.05。2.2.3HIF-1α對結(jié)腸上皮自噬能力的影響通過前面的實(shí)驗(yàn)我們知道HIF-1α在腸道穩(wěn)態(tài)維持中扮演著重要角色，腸道上皮特異性敲除HIF-1α?xí)觿SS對腸道粘膜的損傷。為探討腸上皮細(xì)胞HIF-1α在生理狀態(tài)下的作用，我們測定了HIF-1αLoxP/LoxP和HIF-1αΔIEC小鼠結(jié)腸的生理功能。如圖3a.b所示，與HIF-1αloxP/loxP小鼠相比，HIF-1αΔIEC小鼠結(jié)腸上皮中ATG16L1和LC3蛋白的表達(dá)顯著降低。而HIF-1αΔIEC小鼠結(jié)腸上皮中P62蛋白的表達(dá)明顯增加(P<0.05)。ATG16L1和LC3免疫組織化學(xué)染色顯示與HIF-1αloxP/loxP小鼠相比，HIF-1αΔIEC小鼠，遠(yuǎn)端結(jié)腸切片中的ATG16L1和LC3蛋白水平有降低的趨勢(圖3c.d)。為了進(jìn)一步確定ATG16L1、LC3和P62蛋白表達(dá)的局部改變，我們用共聚焦顯微鏡檢測了離體結(jié)腸中ATG16L1、P62和LC3的免疫熒光。HIF-1αΔIEC小鼠結(jié)腸上皮ATG16L1和LC3表達(dá)下調(diào)，同時(shí)P62表達(dá)上調(diào)(圖3e)。為了更直接地評(píng)估小鼠結(jié)腸自噬的變化，我們使用TEM觀察自噬小體，因?yàn)檫@被認(rèn)為是評(píng)估自噬的金標(biāo)準(zhǔn)方法。HIF-1αΔIEC小鼠結(jié)腸上皮細(xì)胞中雙膜囊泡

陸軍軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文 的積聚明顯低于 HIF-1αlox P/loxP小鼠(圖 3f 和 3e)。綜上所述，這些結(jié)果表明缺氧誘導(dǎo)因子-1α 的缺失導(dǎo)致內(nèi)皮細(xì)胞自噬的下調(diào)。


本文編號(hào)：3367713