目的酒精性肝�。ˋlcohol liver disease,ALD）是一類影響人類健康的全球性肝臟疾病,它包括酒精性肝炎（Alcohol hepatitis,AH）,酒精性脂肪肝（Alcohol fatty liver,AFL）,酒精性肝纖維化和肝硬化。大量飲酒是導(dǎo)致酒精性肝病的最主要原因。酒精性脂肪肝是酒精性肝病的早期階段,它伴隨著肝細(xì)胞大量的脂質(zhì)積累以及肝細(xì)胞的氧化應(yīng)激。因此有效的逆轉(zhuǎn)酒精性脂肪肝是防止酒精性肝病惡化的重要措施。目前對于酒精性脂肪肝仍缺少有效的治療藥物和方法,闡明酒精性脂肪肝形成的相關(guān)分子機制對減少酒精性脂肪肝和酒精性肝病的發(fā)生具有重要意義。MicroRNA-203（miR-203）作為腫瘤抑制因子,它能夠抑制肝細(xì)胞的增殖和遷移進而抑制肝細(xì)胞癌（hepatocellular carcinoma,HCC）的發(fā)生和發(fā)展。本課題組前期通過收集酒精肝病人和正常人血液提取RNA高通量篩查對比發(fā)現(xiàn),miR-203表達在酒精肝病人中降低,但其在酒精性脂肪肝中的作用和機制尚不清楚且亟待研究。Lipin1是Lipin家族的重要一員,它具有Lipin家族共有的調(diào)控功能。一方面它能夠促進... 

【文章來源】：安徽醫(yī)科大學(xué)安徽省

【文章頁數(shù)】：83 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
中英文縮寫詞對照
中文摘要
英文摘要
1.引言
2.實驗材料
    2.1 動物
    2.2 實驗細(xì)胞
    2.3 藥品與試劑
    2.4 儀器與設(shè)備
    2.5 溶液和試劑的配制
    2.6 圖像分析軟件
3.實驗方法
    3.1 酒精性脂肪肝模型建立
    3.2 肝臟組織 HE 染色
    3.3 肝臟組織油紅染色
    3.4 肝臟免疫組化
    3.5 慢病毒過表達miR-203載體構(gòu)造及體內(nèi)感染
    3.6 血清 ALT，AST，TG，TCH 測定
    3.7 細(xì)胞培養(yǎng)
    3.8 MTT發(fā)測定細(xì)胞增殖
    3.9 細(xì)胞內(nèi)油紅染色
    3.10 細(xì)胞免疫熒光
    3.11 AML-12細(xì)胞總蛋白提取
    3.12 細(xì)胞核蛋白提取
    3.13 Westernblot
    3.14 實時定量PCR
    3.15 雙熒光素酶報告實驗
4.實驗結(jié)果
    4.1 miR-203在酒精性脂肪肝模型中的表達
        4.1.1 酒精性脂肪肝模型的建立和病理變化
        4.1.2 miR-203在小鼠酒精性肝臟組織和酒精刺激的 AML-12 細(xì)胞中的表達
    4.2 體內(nèi)慢病毒載體過表達miR-203對小鼠肝臟脂質(zhì)代謝的影響
        4.2.1 體內(nèi)過表達miR-203模型的建立和驗證
        4.2.2 過表達miR-203對小鼠肝臟脂質(zhì)代謝的影響
    4.3 體外過表達miR-203對AML-12脂質(zhì)代謝的影響
        4.3.1 體外過表達miR-203模型的建立及驗證
        4.3.2 過表達 mi R-203 對 AML-12 細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)代謝的影響
    4.4 miR-203能夠靶向調(diào)控 LPIN1
    4.5 Lipin1在酒精性脂肪肝中的表達
        4.5.1 Lipin1在酒精性脂肪肝小鼠肝臟中的表達
        4.5.2 Lipin1在酒精刺激的AML-12細(xì)胞中的表達
    4.6 沉默Lipin1對AML-12細(xì)胞脂質(zhì)代謝的影響
        4.6.1 si-RNA沉默AML-12細(xì)胞中內(nèi)源性Lipin1的表達
        4.6.2 沉默Lipin1抑制了肝細(xì)胞的脂質(zhì)積累
    4.7 miR-203對Lipin1亞細(xì)胞定位的調(diào)節(jié)作用
5.討論
6.結(jié)論
參考文獻
附錄
致謝
綜述
    參考文獻


【參考文獻】：
期刊論文
[1]Adult mouse model of early hepatocellular carcinoma promoted by alcoholic liver disease[J]. Aditya Ambade,Abhishek Satishchandran,Benedek Gyongyosi,Patrick Lowe,Gyongyi Szabo.  World Journal of Gastroenterology. 2016(16)



本文編號：3357384